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酶切后的产物为何必须进行纯化
做完PCR和
酶切后为什么要
做
纯化
?
答:
因为你做pcr和酶切都会引入很多试剂啊离子啊什么的可能影响后一步实验 而且你做
酶切后
不
纯化
的话 切下来的片段还在那里可能发生自连
质粒提取与
纯化
的区别做
酶切的
质粒
需要
做纯化吗
答:
这个由几个方面的因素决定:1.保存的酶切质粒是否经过纯化,如果经过纯化,比较容易保存
2.此酶切质粒是否经过反复冻融.如果频繁多次冻融,DNA会比较容易降解,所以建议保存的时候能够分装冻存,每次取出一部分来,不反复冻融,保存会比较好 3.酶切质粒的浓度,通常浓度越高,质粒也会越稳定.以前我们实验室做...
双
酶切
时,PCR样
为何
需
纯化
?
答:
首先,你用的是质粒模板;其次,你扩增得到的非单一条带,如果不
纯化
直接
酶切
,那么得到的将是带有相应酶切位点的几种片段,继续试验的话,菌落PCR鉴定时可能会出现几种不同大小的条带,运气好的话也会有阳性克隆。你也可以做个试验尝试下。
PCR
产物酶切后需要纯化
,我们是用的试剂盒,但是试剂盒纯化的原理是什么呢...
答:
PCR
产物酶切后
跑胶,不是有你
需要
的条带么,你看大小切出你需要的条带,试剂盒只是把你切出的胶质里的DNA回收回来 柱子黏附的是DNA 不懂可以追问
请问PCR
后的酶切
跑胶的原理和目的,谢谢。
答:
回收
纯化
得到目的条带,以用于下游的实验。
1、
为什么
质粒
酶切产物需要
电泳后再胶回收,而不是直接
进行酶
连
答:
1、分离和
纯化
:电泳能够有效地将
酶切产物
分离,通过凝胶电泳可以将不同大小的DNA片段分开。胶回收则能够进一步纯化所需的DNA片段,去除存在的杂质和小片段。2、去除残留的酶:在酶切反应中,酶会与DNA片段结合或残留。通过电泳和胶回收,可以去除这些残留的酶,防止它们干扰后续的酶连反应。3、提高酶连...
质粒
酶切的纯化
方式会影响连接吗
答:
需要
,被切掉的部分同样带有粘性末端(因为粘性末端的碱基互补),会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法
纯化
,可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。胶回收纯化的好处是直观的判断酶切实验结果是否理想,是否酶切完全,胶回收可以避免收集不完全
酶切的
质粒片段(包括完整的环状质粒和线性质粒...
转化大肠杆菌之前用了PCR
纯化
,会不会有影响
答:
如果你指的是PCR
产物
,在
酶切
和连接之前做了纯化,这往往是必要的(如果条带单一,纯度好,酶切和连接体系成熟,也可以不纯化);如果是在连接试验后,再用试剂盒纯化一次,这会对实验有很大的影响:1、纯化过程本身会有较大损失,起始量约少,相对损失就越大;2. pcr
的纯化
试剂盒往往是针对小片段...
单
酶切后
直接电泳还是
纯化
后电泳
答:
纯化
后电泳。纯化后电泳可以使单
酶
浓度更高,缓冲更长。单酶是一种从植物中经一系列科学方法提取精致而成的酶制剂,本产品酶系纯正,活力较高,有较好的耐热性,无异味。
目标片段和质粒
酶切后
连接之前
需要
胶回收吗
答:
需要
,被切掉的部分同样带有粘性末端(因为粘性末端的碱基互补),会干扰目的片段与载体连接。如果不想用胶回收方法
纯化
,可以选择吸附柱过滤除掉被切掉的小分子片段。胶回收纯化的好处是直观的判断酶切实验结果是否理想,是否酶切完全,胶回收可以避免收集不完全
酶切的
质粒片段(包括完整的环状质粒和线性质粒...
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