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双酶切和单酶切的区别
请大侠赐教:什么时候用
单酶切
,什么时候用
双酶切
答:
单酶切就是只用一个限制性内切酶去切你的质粒,环状的质粒就成为线状的了,但质粒的大小不变
双酶切用两个限制性内切酶,质粒上就产生了两个缺口,环状质粒就变成两段线状DNA了.回收你需要的那一段,因为它的两端和你的目的基因带有互补的黏性末端(当然目的基因也要用这两种酶切才行),在T4DNA连接酶...
用PCR做基因克隆,如何判断
酶切
效果好坏
答:
一般这种情况会根据实际大小进行判断,对于质粒来讲,有三种情况,线性质粒、超螺旋、开环结构三种,
其在琼脂糖凝胶重的大小是不一样的
,大小顺序,从上往下看:开环>线性>超螺旋。一般单酶切之后,此时的情况类似于开环结构,显示的是整个质粒的全长,此时对于maker去比对即可。2、双酶切位点情况 这...
分子生物学
酶切
拜托了各位 谢谢
答:
双酶切就是在用2个酶来切啊,2个限制性酶切位点呗
,因为单酶切的时候会形成本身自己切完的自我组装,相当于切了质粒的话,会形成质粒和质粒的自己重组,因为形成的粘性末端是一样的,而双酶切可以避免这个情况,在连接的时候能够更加有效的得到所需要的重组DNA,实用当然是双酶切实用啊,现在实验室...
质粒或目的基因什么时候用同一种
酶
,什么时候用两种?
答:
单酶切
:如果用同一种限制酶切割质粒和目的基因,会产生四个相同的黏性末端,那么可能会出现四个结果。(1)质粒和质粒连接(2)质粒和目的基因连接(3)目的基因和目的基因连接(4)质粒和目的基因环化。因此为了防止出现上面的情况,会采用
双酶切
。双酶切就是用两种酶切割目的基因和质粒,这样质粒和...
目的基因
酶切
后电泳图怎么看高中选修三的问题谢谢各位了
答:
一般
单酶切
之后,此时的情况类似于开环结构,显示的是整个质粒的全长,此时对于maker去比对即可。2、
双酶切
位点情况 这类情况被双酶切之后,产物里面有两个片段分布,一个大片段,一个小片段,从琼脂糖凝胶电泳中看,前为小片段,后为大片段。我们再根据目的片段和质粒的实际长度对比切割后各自的长度...
单酶切和双酶切
同时作用后有几种情况?
答:
以环状质粒为例,一般可以采用第一个酶酶切后割胶回收进行第二个
酶的单酶切
、直接
双酶切
两种 单酶切:一个一个切,第一次环变直线,第二次,直线变两段 双酶切:直接会有两段 还有一种,完全弥散,没条带,即酶量过了。
对于载体的
单酶切和双酶切
,胶图分别会如何?为什么会这样啊?谢谢帮忙回 ...
答:
双酶切
一般会有3条带,而且正确现象应只有一个是非常亮的。因为两种酶识别两个位点切开,无论是质粒还是目的片段两端的粘性末端完全不同,还是拼图,内容不同,两端切合口也不同,除了一种连接方式外没有其他连接了。胶途中3条带分别为:目的片段条带,空质粒条带,最亮的重组质粒条带。
酶切的
定义
答:
酶切可以是
单酶切
也可以是
双酶切
。单酶切操作比较简单,但双酶切如果两种酶所用缓冲液成分不同(主要是盐离子浓度不同)或反应温度不同,这时可以采用如下措施解决:1)先用一种酶切,然后乙醇沉淀回收DNA分子后再用另外一种酶切;2)先进行低盐要求的酶酶切,然后添加盐离子浓度到高盐的酶反应...
请问酶切时分别单酶切可以切动,而
双酶切
结果
和单酶切
相同,是怎么回事啊...
答:
单酶
电泳线索几个更亮带的,你带根据基因的大小选择未必是你想要的。原因是相同的粘性末端形成消化,就像一个拼图,除了内容,双方充分满足。结合方式太多的可能性,如质粒和靶基因已正确连接,反转连接质粒和靶基因,质粒和质粒连接,连接目的基因和靶基因。
双酶切
一般会有三个频段,正确的现象只应该有...
基因工程使用
双酶切和单酶切
答:
双酶切
之后,由于用的两种酶切出来的粘性末端序列不一样,所以一般载体不会再自连。而你说的载体和基因片段再重新连起来,也是不太可能的,因为连接反应是需要ATP提供能量的,酶切体系里面没有ATP,所以不会再连接。质粒切开后,一般是通过琼脂糖凝胶电泳的方法,把大小不同的两个片段分离开,然后把...
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