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蛋白质测定的实验原理
folin酚法
测定蛋白质的原理
是什么?
答:
这种
蛋白质测定
法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难(可订购),逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色
原理
与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从而提高了
检测蛋白
质的灵敏度。这两种显色反应产生深蓝色的...
怎样用双缩脲法
测定蛋白质
?
答:
双缩脲法灵敏度较低,但操作简单快速,是生物化学领域中
测定蛋白质
含量的常用方法之一,也可用于豆类、油料、米谷等作物种子及肉类等样品测定。双缩脲法 1.
原理
当脲(尿素)被小心地加热至150~160℃时,可由两个分子间脱去一个氨分子而生成二缩脲(也叫双缩脲)。双缩脲在碱性条件下能与硫酸铜作用...
双缩脲
测定蛋白质
含量
实验
的干扰因素有哪些
答:
g/mL氢氧化钠溶液,再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜溶液,再加入氢氧化钠溶液,则无法充分制造碱性环境,此时硫酸铜会与氢氧化钠发生复分解反应,生成蓝色氢氧化铜沉淀,导致现象不清,无法较好地达到
实验
目的。2、
蛋白质
浓度:双缩脲法常用于0.5g/L~10g/L含量的蛋白质溶液
测定
。
如何
测定蛋白质
中的氮元素含量?
答:
这是最经典的方法了——微量凯氏法 一、
原理
植物组织中的有机氮化物包括蛋白氮和非蛋白氮。非蛋白氮主要是氨基酸和酰胺,以及少量无机氮化物,是可溶于三氯乙酸溶液的小分子。可加入三氯乙酸,使其最终浓度为5%,将
蛋白质
沉淀出来,分别
测定
总氮、蛋白氮或非蛋白氮;通常只测定总氮或蛋白氮。将植物...
简述考马斯亮蓝法
测定蛋白质
含量的过程
答:
考马斯亮蓝法在
测定蛋白质
含量时具有操作简便、反应迅速、颜色稳定、灵敏度高等优点。但同时需要注意该方法也受到某些因素影响,如试剂浓度、缓冲液pH值、
实验
温度等。因此,在实验过程中需要严格控制这些因素,以保证测定结果的准确性。考马斯亮蓝法只能测定真核细胞的蛋白质含量,不能用于原核细胞。考马...
如果
测定
某种
蛋白质的
分子量,采用何种层析法最好?其
原理
是什么?
答:
需要
测定蛋白质的
分子量,可以直接用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳就可以了,层析法不能测定蛋白子的分子量,但是可以根据分子量的大小来分离开蛋白。常用技术 1、沉淀,2、电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的,在电场中能向电场的正极或负极移动。根据支撑物不同,有薄膜电泳、凝胶电泳等。3、...
蛋白质的
两性解离和等电点
测定实验
结果
答:
在等电点附近,蛋白质溶液开始变浑浊,离心可见沉淀。远离等电点,蛋白质溶液开始变澄清,离心未见沉淀。当蛋白质溶液处于某一pH时,蛋白质解离成正、负离子的趋势相等,即成为兼性离子,净电荷为零,此时溶液的pH称为
蛋白质的
等电点。在等电点时蛋白质的溶解度最小,在电场中不移动。在pI时,蛋白...
蛋白质
浓度
测定
双缩脲法
实验原理
?
答:
蛋白质
浓度
测定
双缩脲法
原理
将尿素加热,两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2).双缩脲在碱性溶液中与Cu2+结合生成紫色络合物,这一呈色反应称为双缩脲反应.蛋白质分子中的肽键类似双缩脲结构,故亦能呈双缩脲反应.
试述用凯氏定氮法
测定
面粉中
蛋白质
含量
的原理
,简要步骤和计算公式...
答:
实验
室常规仪器及下列各项:凯氏烧瓶:500mL;可调式电炉;蒸汽蒸馏装置;铰肉机:篦孔径不超过4nm;组织捣碎机;粉碎机;研钵:玻璃或瓷质;化学消化器,凯氏定氮仪,空气滤过器 1.2
试验
方法 1.2.1微量凯氏定氮法 微量凯氏定氮法的
原理
样品与浓硫酸和催化剂一同加热消化,使
蛋白质
分解,其中碳...
考马斯亮蓝法
测定蛋白质的
公式是什么?
答:
公式是根据测量结果自己算出来的:考马斯亮蓝比色法是由Bradford等人建立 的1种
测定
微量
蛋白质的
方法L5],考马斯亮蓝所含疏 水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成的蓝色蛋白质一染料复合物,在595 nm处有最大吸光度,复合物1 h内保持稳定.在一定的蛋白质...
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