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蓝白斑筛选目的
分离培养时,如何识别琼脂平板上的
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菌
答:
1.眼睛直接看,只能分别菌落形态上有差别的菌,比如真菌和细菌,其菌落形态差别很大;或者带有颜色的菌落,比如
蓝白斑筛选
。2.眼睛无法分辨的,比如是否带有
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基因的菌落,这时候就要靠pcr验证和酶切验证等其他手段来分辨了。有些细菌导入目的基因时带有筛选基因,可以在抗性平板或者营养缺陷的平板上存活,...
蓝白斑筛选
问题
答:
那么,那些带一点蓝色的
白斑
你有没有做菌液PCR呢?或者测序呢?我以前有见过带点蓝色的白斑,其实也是蓝斑。没有白斑的原因,要么是没连上,要么是没转化成功。从连接产物,到菌种都排查一下吧!
蓝白斑筛选
结果相反是为什么
答:
这个好像是分子生物学课后习题嘛!前面那是是假阴性,由于插入
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片段太短,报道称有30%的假阴性,但为什么会有60bp的小片段,多数是实验过程中的污染,也有可能是基因组被酶切的小片段。后者是假阳性,即在载体与插入片段连接前,载体末端被核酸酶酶切掉一点,被轻微降解的载体然后自连接,被轻微降解的...
pET28b能不能进行
蓝白斑筛选
答:
不能,因为没有lacZ的alpha片段编码基因。大多数表达载体为了高效表达
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蛋白,会避免插入其它不是必需的编码序列。参考资料:http://baike.baidu.com/view/161221.htm
大肠杆菌转化失败的原因
答:
1、转化效率太低:在转化时,可以设立阳性对照,判断转化实验是否正常。要是阳性对照也长不出菌落,证明转化实验没有成功。2、连接效率太低:连接反应的两种成分DNA应该在一个适当的比例,要是质粒太多,则会出现很多空质粒,最终转化后依然会长出菌落,但菌落却不含
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DNA,可以通过
蓝白斑筛选
排除含有空...
为何
蓝白斑筛选
后要菌液pcr?
答:
排除假阳性的情况,有时候白菌落也不一定是阳性克隆,而且这种情况还不少见
如何用标记基因检测
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基因导入载体
答:
一般标记基因的DNA序列是已知的,若选用抗氨苄青霉素基因,则可在
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基因导入后用氨苄青霉素来处理受体细胞,若无异常,则抗氨苄青霉素已合成,说明基因已得到表达。标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。因为标记基因和目的基因同位于运载体上,要导入都导入,要表达则都会表达。检测分三种,首先是通过...
筛选
阳性克隆的方法和原理?
答:
最常见的就是
蓝白斑筛选
,详细的楼主可参考这个http://baike.baidu.com/view/161221.htm 方法很多,除蓝白斑筛选外,像 菌落PCR验证:详见http://baike.baidu.com/view/4118663.htm 从细菌里提取质粒后双酶切验证:用构建重组质粒时的两种限制性酶进行酶切,电泳,观察条带是否和重组之前,
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基因...
如果经过
蓝白斑筛选
后选出白色,再怎么确认它就是真正的片段
答:
酶切鉴定或者PCR鉴定,得到与设计相同的
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片段。最好最准确的确认方法还是测序比对。
为什么在抗性板上长出的转化子或经
蓝白斑筛选
的转化子还需要进行进一步...
答:
为什么再好卡信访上张错的总华资河金廊为防摔洗的转化,只好写进一步的
筛选
,因为这是员工唱的正规,这是一个常规。
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