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简述蓝白斑筛选的原理
蓝白斑筛选的原理
是什么
答:
蓝白斑筛选是一种基因工程常用的细菌重组子的筛选方法
。野生型大肠杆菌(E.Coli)产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。5-溴-4-靛蓝可使整个菌落产生蓝色变化。在经人工插入外源基因后,突变型大肠杆菌的β半...
简述蓝白斑筛选的原理
。
答:
蓝白斑筛选的原理
分类:生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法: 是根据载体的遗传特征筛选重组子,如α-互补、抗生素基因等
。现在使用的许多载体都带有一个大肠杆菌的DNA的短区段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的调控序列和前146个氨基酸的编码信息。在这个编码区中插入了一个多克隆位点(MCS)...
蓝白斑筛选的原理
是什么?
答:
而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,称为
蓝白斑筛选
。
蓝白斑筛选的原理
是什么?
答:
由α-互补而产生的LacZ+细菌在诱导剂IPTG(异丙基硫代半乳糖苷)的作用下
,在生色底物X-Gal存在时产生蓝色菌落。而当外源DNA插入到质粒的多克隆位点后,几乎不可避免地破坏α片段的编码,使得带有重组质粒的LacZ-细菌形成白色菌落。这种重组子的筛选,称为蓝白斑筛选。缺点 由于多种原因,一些白色菌落可...
蓝白斑筛选
答:
蓝白斑筛选的机理
由α-互补产生的Lac+ 细菌较易识别
,它在生色底物X-gal(5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)下存在下被IPTG(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷)诱导形成蓝色菌落。当外源片段插入到载体的多克隆位点上后会导致读码框架改变, 表达蛋白失活, 产生的氨基酸片段失去α-互补能力, 因此在...
从大肠杆菌基因型理解
蓝白斑筛选的原理
答:
蓝白斑
:</原生lac操纵子破坏并引入lacZΔM15的菌株(如DH5a、DH10B和EPI400),lacZα功能状态会影响是否产生蓝色斑点,这是一种有效的
筛选
策略。XL10-Gold菌株的情况类似于前两者,但筛选过程中通常依赖额外的抗性基因(如氯霉素)来区分lacZΔM15的缺失效果。随着基因编辑技术的进步,科学家可以直接针对...
简述
α互补和
蓝白斑筛选的原理
答:
在重组质粒中插入片段使α-肽失活,可在指示平板上通过颜色
筛选
鉴别。不带有插入片段的载体,表达有功能的β-半乳糖苷酶,所用的宿主菌在染色体或附加体上缺失掉lacZM15基因,导致内源α-肽失活。载体pGEMZ或其它含lacZ基因的α-肽互补细菌,具有β-半乳糖苷酶的ω片段,所得功能β-半乳糖苷酶(α...
蓝白
筛选
pcr的结果
答:
能够使得菌落清晰地显示蓝斑或者白斑。在蓝白斑筛选实验中,能够使得菌落清晰地显示蓝斑或者白斑,颜色对比明显,能够清晰辨别出目的菌落。蓝白斑筛选的原理分类生物科学蓝白斑筛选是重组子筛选的一种方法
是根据载体的遗传特征筛选重组子
,如α-互补、抗生素基因等。
蓝白斑筛选
问题!!
视频时间 00:48
有没有高人能告诉我
蓝白斑筛的
步骤,
原理
。谢谢。 有加分
答:
1.将目的基因插入LacZ'靠近5‘端有多克隆位点,是否成功插入有待
蓝白斑筛选
鉴定。2.通过一定的方法,如CaCl2诱导法将目的基因转入宿主菌(失去正常氨基端(5'端)的B-半乳糖苷酶的一种突变体)3.将宿主菌至于含有IPTG,Xgal,以及抗生素Amp固体培养基中培养 4.形成白色菌斑,说明目的基因插入了多克隆...
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