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大肠杆菌质粒的提取
质粒
dna
提取
及电泳检测实验报告?
答:
1、
大肠杆菌
细胞溶解将含有大肠杆菌细胞的培养物取1-5ml放入1.5ml离心管中,以10000rpm离心10分钟,弃上清后加入500μl胰酶(20mg/mL)+裂解液(0.2%SDS,50mM Tris-HCl pH8.0,2mM EDTA),37℃水浴振荡2小时。2、
质粒
DNA
提取
将上述细胞液加入等体积的酚/氯仿/异丙醇混合液(25:24:1),...
如何
提取大肠杆菌质粒
DNA?
答:
碱裂解法通常有大量提取法和小量提取法,其提取原理是一样的,只需体积按一定比例扩大
。纯化质粒DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时,对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿抽提。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单步骤去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化...
TG1
大肠杆菌
能提出
质粒
,求解~
答:
碱裂解法:此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析
。方法如下:1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜。3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/...
基因工程实验Ⅱ
大肠杆菌质粒
DNA的抽提及检测『Protocol』
答:
②细菌中的RNA可以通过RNaseA去除 ③蛋白质的去除 :细菌中的蛋白质可以通过酚/氯仿/异戊醇抽提
,酚可以使蛋白质变性,氯仿将微溶 于水的酚抽提到有机相中,使其与水相中的DNA分离。分离后的质粒DNA可以通过乙醇回收,乙醇可以消除核酸水化层,暴露其带负电的磷酸基团,因 此在阳离子充足的环境中可以...
质粒提取的
主要步骤是什么及其作用 分子生物学
答:
操作步骤: 本实验方法适用于从 1-10ml 过夜培养的
大肠杆菌
菌液中
提取质 粒
。提取量受菌株、
质粒
拷贝数、菌液体积和培养时间、培养基类型 等因素的综合影响 1. 收菌:将过夜培养(37℃,12-16 小时)的菌液于室温≧10,000g 离心 1-2 分钟,彻底弃除上清。注意:高拷贝质粒建议使用≦5ml 菌液...
质粒提取的
注意事项
答:
质粒
小提主要用于用于
大肠杆菌
中质粒DNA的小量
提取
,获得的质粒可以用于常规的载体构建,一般适用于5ml以下菌液。而质粒中提,在小提的基础上可以进一步去除菌液中的内毒素,获得的质粒可以用于细胞转染,常规需要菌液量为10-15ml。质粒大提与中提方法相同,可一次抽提100ml-300ml菌液获得大量质粒。
植物基因工程实验技术-
提取质粒
答:
提取大肠杆菌
中的质粒 查看预约离心机,相应抗生素LB液体要有,管子要有灭好的 摇菌不能超16h 低拷贝数
质粒的
纯化 从过夜培养的菌液中纯化得到的低拷贝质粒的得率大约为 0.1-1 μg/mL,若要提取中低拷贝数的质粒 DNA,请遵循以下准则: 培养体积:使用高拷贝
质粒菌
培养基的 2 倍体积。
大肠杆菌
基因组DNA
提取
和
质粒
DNA提取的异同点?
答:
提取的步骤基本上都属DNA
的提取
步骤,包括细胞裂解,DNA释放,纯化,最后沉淀溶解。
质粒提取
过程中,有一个DNA变性、复性的过程,这个与基因组提取完全不同,这是利用质粒是以超螺旋结构存在于
大肠杆菌
中的特殊状态,分离纯化质粒时总是会利用这个特点来分离基因组DNA与质粒DNA。
质粒提取的
基本原理
答:
煮沸裂解法对于小于15kb的小
质粒
很有效,可用于
提取
少至lmL(小量制备),多至250mL(大量制备)菌液的质粒,并且对大多数的
大肠杆菌
菌株都适用。但对于那些经变性剂、溶菌酶及加热处理后能释放大量碳水化合物的大肠杆菌菌株,则不推荐使用该法。这是因为碳水化合物很难除去,会抑制限制酶和聚合酶活性。...
大肠杆菌提取的质粒
有哪三种构型
答:
在琼脂糖凝胶电泳中存在三条电泳条带,按照Marker的位置从大到小依次为:线性DNA,松散的环状DNA,超螺旋结构DNA(在松散环状DNA的基础上进一步盘曲折叠形成的紧致的环状DNA)其实这三种结构分子量相同,由于空间结构的差异导致在琼脂糖凝胶电泳中迁移率不同,因此出现三条条带。标准的
质粒提取
实验中只存在...
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