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大肠杆菌质粒提取实验步骤
TG1
大肠杆菌
能提出
质粒
,求解~
答:
1、接1%含质粒的大肠杆菌细胞于2ml LB培养基。2、37℃振荡培养过夜
。3、取1.5ml菌体于Ep管,以4000rpm离心3min,弃上清液。4、加0.lml溶液I(1%葡萄糖,50mM/L EDTA pH8.0,25mM/L Tris-HCl pH8.0)充分混合。5、加入0.2ml溶液 II(0.2 mM/L NaOH,1% SDS),轻轻翻转混匀,置于...
质粒提取
的主要
步骤
是什么及其作用 分子生物学
答:
操作
步骤
: 本
实验
方法适用于从 1-10ml 过夜培养的
大肠杆菌
菌液中
提取质 粒
。提取量受菌株、
质粒
拷贝数、菌液体积和培养时间、培养基类型 等因素的综合影响 1. 收菌:将过夜培养(37℃,12-16 小时)的菌液于室温≧10,000g 离心 1-2 分钟,彻底弃除上清。注意:高拷贝质粒建议使用≦5ml 菌液...
植物基因工程
实验
技术-
提取质粒
答:
下面步骤来自实验室的试剂盒,不同试剂盒步骤不一样。
质粒DNA的提取方法主要有碱裂解法、煮沸法、酚氯仿裂解法
,该试剂盒使用的是碱裂解法(说明书 http://www.biomiga.com.cn/a7/20201220_230008191.pdf )。此方法适用于小量质粒DNA的提取,提取的质粒DNA可直接用于酶切、PCR扩增、银染序列分析。方...
质粒
DNA的粗
提取过程
答:
p1:葡萄糖使悬浮后的
大肠杆菌
不会快速沉积到管子的底部;EDTA是Ca²⁺和Mg²⁺等二价金属离子的螯合剂,其主要目的是为了螯合二价金属离子从而达到抑制DNase的活性;可添加RNase A消化RNA。p2:此步为碱处理。其中NaOH主要是为了溶解细胞,释放DNA,因为在强碱性的情况下,细胞膜...
基因工程
实验
Ⅱ
大肠杆菌质粒
DNA的
抽提
及检测『Protocol』
答:
加入500ul溶液W,12000rpm离心1min,弃滤液 (重复此
步骤
一次,洗掉多余盐离子及乙醇)↓ 12000rpm离心3min (彻底去除纯化柱中残留的液体)↓ 将DNA纯化柱置于新的离心管中,向纯化柱中央处悬空滴加80ul溶液Eluent,室温静置2min (将硅胶吸附柱上的
质粒
DNA洗脱下来)↓ 12000rpm离心1min (管底即为...
如何
提取大肠杆菌质粒
DNA?
答:
碱裂解法通常有大量
提取
法和小量提取法,其提取原理是一样的,只需体积按一定比例扩大。纯化
质粒
DNA时通常还利用了质粒DNA相对较小及共价闭环两个性质。开始进行克隆时,对于小量制备的质粒DNA,经过苯酚、氯仿
抽提
。RNA酶消化和乙醇沉淀等简单
步骤
去除残余蛋白质和RNA,所得纯化的质粒DNA已可满足细菌转化...
质粒提取
的原理和
步骤
答:
用了不新鲜的0.4 N NaOH,即便是有SDS也无法有效溶解
大肠杆菌
(不妨可以自己试一下),自然就难高效率
抽提
得到
质粒
。如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒,因为SDS也是碱性的,只是弱了点而已。很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA变性,以便沉淀,这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。有...
质粒提取步骤
及原理
答:
1、首先,将培养好的细菌离心,收集沉淀。将沉淀加入裂解缓冲液中,使细菌细胞壁破裂,释放出
质粒
DNA。2、其次,加入蛋白酶K等蛋白酶,消化蛋白质,与质粒DNA分离开。加入乙醇或异丙醇等沉淀剂,使质粒DNA沉淀。用百分之70乙醇洗涤沉淀,去除残留的盐分和杂质,离心干燥。3、最后,将干燥的质粒DNA加入...
1.将之前已经构建好载体的DH5α活化
提取质粒
2.转化至BL21后筛选 ,请问...
答:
活化就是将冻存的菌液,在对应抗性(视具体
质粒
而定)的平板上划线,待菌落长起来后挑取单菌落,摇起来后再提质粒。转化是将冻存的BL21感受态融化后插在冰上5-10分钟,然后将5 ul质粒加入感受态细胞,放在冰上20分钟。再将其放在42℃恒温槽热激1-2分钟,然后迅速放回冰中静置3-5分钟。之后将感受态...
质粒提取
的
步骤
答:
1.挑取琼脂培养皿上的单个菌落,移至3-10mlLB培养液中,37℃150rpm培养过夜。2.取1.5ml培养液移至Eppendorf管内,12000rpm离心1分钟,弃上清液。3.将细菌沉淀悬浮于100μl溶液(GTE溶液)中,强烈振荡使之充分混匀。4.加入200μl新鲜配置的溶液(NaOH/SDS溶液),盖严管盖轻轻颠倒离心管数次以混合...
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