高二生物 基因工程 目的基因和质粒是否要用同一限制酶进行切割？

Question

为什么第一节说要用不同的限制酶切割，而第二节又说用同一限制酶切割？
到底是什么呢？
求高手解释。

Answer 1

目的基因和质粒要[同时]用同一种限制性核酸内切酶切割，不然就没法连了。但最好用不同的限制酶切两端（切目的基因是不是应该切两下么），防止载体自连或目的基因自连。

啊啊，这道题。这题是这样的，你仔细看一下质粒，若用酶2切，那质粒两处酶切位点都要断，所以质粒只能用酶1切，保证其只有一个缺口。然后目的基因则只能用酶2切，这样两端才都能切下来。（若用酶1的话目的基因右端是切不了的）

希望能帮到你。

Answer 2

我知道LZ的问题是什么了，“同一限制酶”应该是说能识别相同碱基序列，并具有相同的切点，你这道题所说的“不同”其实是指两种限制酶识别的碱基序列和切点不同，但就题论题的话，我想是因为质粒和目的基因的碱基序列不同，才要使用不同的限制酶吧

Answer 3

应该用同一种限制性核酸内切酶切割，这样才能连接；
你说的“不同的酶”情况，实指切目的基因时需要用到两种酶，因为目的基因要切两头，所以为了防止自连一般都是用不同的酶来切的；而质粒只需打开它的环状结构，只切一下就行了。
切质粒的酶必定和切目的基因的两种酶之一相同

Answer 4

不同的目的基因要用不同的切割酶啊、当目的基因要和云载体结合的时候、目的基因和运载体要用同种酶切割、他们才能重组在一起。

Answer 5

质粒作为运载体，必须和目的基因用同种限制酶，否则没法拼接啊。第一节说不用同种是怎么说的？追问

是第一节的练习册上写的。
在DNA连接酶的作用下，上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端可以连接起来，因为2种不同的限制酶切割后形成的黏性末端是相同的。

追答

哦，可能是就题论题吧，题目中应该是给了两种特殊的限制酶，能生成相同末端，而因条件限制，只能用不同种吧，这还真没见过。

追问

1．基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶I的识别序列和切点是--G↓GATCC--;，限制酶II的识别序列和切点是--↓GATC--。
质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割

解析：目的基因要被切成两个粘性末端，只有用限制酶II才能把它切成两个两个粘性末端。若用限制酶II，则两种标记基因的都会被切断而起不到标记基因的作用。

不明白。

追答

哦，感谢辛苦手打。虽然没看到题，但我觉得题目中是不是给出了某种标记基因的某段序列，正好有--↓GATC--所以不能用酶1呀，难道这个标记基因是连在目的基因上的？好吧，我无奈了，好久没复习了，也忘了都。