回答下列有关遗传信息传递和表达的问题．多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损．番茄果实成熟中

Question

回答下列有关遗传信息传递和表达的问题．多聚半乳糖醛酸酶（PG）能降解果胶使细胞壁破损．番茄果实成熟中，PG合成显著增加，能使果实变红变软，但不利于保鲜．利用基因工程的方法减少PG基因的表达，可延长果实保质期．科学家将PG基因反向接到Ti质粒上，导入到番茄细胞中，得到转基因番茄，过程如图1所示．（1）提取目的基因时，若已获取PG的mRNA，可通过______获取PG基因．在该基因上添加结构A可确保基因表达，在结构A上应具有______的结合位点．（2）得到的目的基因两侧需人工合成BamHI单链末端．已知BamHI的识别序列如图2-甲所示，在图2-乙相应位置上，画出目的基因两侧的单链末端______．（3）重组质粒转化到大肠杆菌中的目的是______．（4）用含目的基因的农杆菌感染番茄原生质体后，可用含有______的培养基进行筛选．培养24～48h后取样，在质量分数为25%的蔗糖溶液中，观察细胞______现象来鉴别细胞壁是否再生．（5）由于导入的目的基因能转录反义RNA，其能与______互补结合，抑制PG基因的正常表达．若转基因番茄的保质期比非转基因番茄______，则可确定转基因番茄成功．（6）获得的转基因番茄产生的种子不一定保留目的基因，科研人员常采用______方法使子代保持转基因的优良性状．

Answer 1

（1）已获取PG的mRNA，可通过逆转法获得目的基因；基因表达包括转录和翻译两个步骤，为了确保基因表达，结构A应该具有RNA聚合酶的结合位点．
（2）目的基因两侧需人工合成BamHI单链，已知BamHI的识别序列及切割位点为，则目的基因两侧的黏性末端如图所示：

（3）重组质粒转化大肠杆菌的目的是让目的基因大量复制．
（4）由图可知质粒上含有卡那霉素抗性基因，所以含重组质粒的农杆菌感染番茄原生质体后将会使原生质体获得抗卡那霉素的能力，因此可用含卡那霉素的培养基进行筛选；植物细胞在质量分数为25%的蔗糖溶液中会发生质壁分离现象，所以可以用来鉴别细胞壁是否再生．
（5）由以上分析可知，反义RNA和与天然PG基因转录的mRNA结合，从而抑制翻译过程；若转基因番茄的保质期比非转基因番茄长，则可确定转基因番茄成功．
（6）获得的转基因番茄产生的种子（是有性生殖的后代，会发生性状分离）不一定保留目的基因，故要保持该优良性状，可采用无性繁殖的方法，如植物组织培养．
故答案为：
（1）逆转录    酶（或RNA聚合酶）
（2）（写出一种即可，但读序方向须正确，且两端须对称互补）
（3）大量复制目的基因（克隆目的基因）
（4）卡那霉素   是否发生质壁分离
（5）天然PG基因转录的mRNA   长
（6）植物组织培养（或无性繁殖）