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切割质粒并保证不能环化可以选用哪种酶?
如题所述
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推荐答案 2022-06-10
碱性磷酸酶。
使用的是酶切连接,选择不同黏末端的酶一般不会发生自身环化如果是平端连接,则需要对载体去磷,也就是碱性磷酸酶处理。此时需要注意你的插入片段两边要有磷酸基团。
质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位,包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸DNA分子。现在习惯上用来专指细菌酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。
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最好用
哪种酶切割质粒
,用哪种酶切割目的基因所在DNA
答:
我们一般都是用II酶进行酶切
。切割的特异性强。
切割质粒
的
酶
是什么
答:
质粒中有两个抗性基因,
一个是四环素抗性基因和氨卞青霉素抗性基因
,如果用酶1来切会破坏两个抗性基因,同时把质粒切成两个片段,所以只能选用酶2,切开一个切口,便于目的基因的插入。同理,目的基因需要用酶1,左右各形成一个切口,这样才能切下一个目的基因。
都有哪几种方法避免载体
质粒
的自
环化?
答:
具体可采用以下方法:(1)用碱性磷酸酶处理限制酶酶解产生的线性载体分子
。碱性磷酸酶可除去线性载体DNA 分子的5¹-磷酸,而留下3¹-羟基基团。经过碱性磷酸酶处理的线性载体分子,除非插入外源DNA 片段,否则就不能重新环化为有功能的载体分子。(2)采用同聚物加尾连接技术,可自动防止线性...
高中生物,切割目的基因和
切割质粒
要分别注意什么,以及分别所具备的原...
答:
1、目的基因的
切割
:①
选取
的限制
酶
,其识别序列
不可
出现在目的基因内部,否则会破坏目的基因。②为了避免目的基因自身
环化
(目的基因的两端被连接成环),一般切割目的基因时选取目的基因两侧产生不同末端的限制酶。2、
质粒
的切割 ①选取限制酶,要和切割目的基因的保持一致。要注意切割位点不可破坏所有标记...
基因工程。用两种限制
酶
切
质粒可以
防止自身
环化?
那为了黏性末端相同是...
答:
1用两种限制酶切
质粒可以
防止自身
环化
。2为了黏性末端相同,切外源DNA也要用两种不同的限制
酶切割
。你说的都对。这里建议你再思考一下,用一
种酶
切质粒和用两种酶切质粒的所有情况。(之后我会说的)
高中生物选修中怎样判断
切割
位点
答:
限制酶一般用于切割含目的基因的DNA片段和切割质粒。切割时需要把握的几个原则:1.选择限制
酶切割质粒
,
不能
把质粒上的标记基因都切掉,最少保留一个标记基因。2.选择限制酶,一般选择限制酶的识别序列是离质粒上的启动子最近的切割位点的酶。3.为了避免质粒的自身
环化
,
可以选择
双酶切。
书上说用两种限制
酶
同时处理粒,检外源DNA其优点
可以
防止
质粒
和含同的...
答:
每种限制性内切酶的
酶
切位点是不一样的,因此,不同的酶切位点
不能
连到一起,相同的才可以。用不同的切,到连接的时候,可以有效防止载体自连,只能让外源DNA片段和载体之间那相同的酶切位点相互连接。
基因工程里,用两种不同的限制
酶
一起
切割质粒
和含目的基因的DNA,
可以
防止...
答:
取下一段目的基因要切两次,也就是说这里切的两次可以分两种不同的
酶
来切,同样的,载体也需要切两次同样也是用这两种酶来切,这样有两组碱基的互补配对,就可以避免载体和载体配对以及目的基因和目的基因配对。(不太确定啊。。。)
下表中列出了几种限制
酶
识别序列及其
切割
位点.如图是转基因抗病香蕉的培...
答:
构建含目的基因的重组
质粒
A时,
选用
BamhHI和HindⅢ
酶
对外源DNA和质粒进行
切割
,这样使目的基因两端的黏性末端不同,可以防止含目的基因的外源DNA片段自身
环化
,同理,也可以防止质粒自身环化.(3)质粒作为运载体的条件:有多个酶切位点、有标记基因、能在宿主细胞内复制并稳定保存,因此在构建重组质粒时...
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为什么用两种限制酶切割质粒
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被切割没有连接的质粒能表达吗
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