Tm值的影响因素如下:
(1)G—C的含量:在一定条件下Tm高低由DNA分子中的G-C含量所决定。G-C含量高时,Tm值比较高,反之则低。这是因为G-C之间的氢键较A-T多,解链时需要较多的能量之故。
Tm值和G-C的含量可用二一个经验公式表示:
(G—C)%=(Tm-69.3)×2.44
在一定条件下(pH7.0,0.165MNaCl中)Tm值与(GC)%含量呈正比关系。因此,通过测定Tm值,可以推算出DNA分子中的碱基百分组成。
(2)DNA所处的溶液条件:DNA溶液中离子强度低时,Tm较低,而且熔解温度范围较宽;离子强度较高时,Tm较高,熔解温度范围较窄。因此,在表示某一来源DNA的Tm值时,必须指出其测定条件。
扩展资料:
Tm值的计算:
对于寡核苷酸(oligonucleotides),Tm的计算可以做到基本准确。为了方便计算,我们忽略氢键部分形成的情况。
不妨假设有两个核苷酸A和B,分别在不同的单链DNA上,形成双链的过程可以表示为:
反应的平衡常数可知为:
根据范德霍夫等式可得
由熔解温度的定义可得
又由于
因此Tm也可表示为:
参考资料来源:百度百科-Tm值
参考资料来源:百度百科-熔解温度