年，达芬奇接受米兰摄政洛多维柯·莫罗的委托，绘制大型壁画《最后的晚餐》。作品描绘了福音书故事中一个关键的时刻，达芬奇选择了耶稣用餐时，宣布在座有人要出卖他，众门徒大为吃惊的情形。为了使人物和情景独具匠心，达芬奇常坐在这幅画钱冥思苦想，这引起修道院院长的不满。后来，为了早日完工，没有画完的犹大的头像竟被达芬奇机智的头脑简单的院长的摸样，这使米兰大公和许多人忍俊不止。
众门徒震惊的情绪不仅流露在脸上，也表现在手部。在画中，达芬奇用了许多细致的手部动作：有人双手按在桌上、有人竖指发问、有人扪心自问，而叛徒犹大则是双手紧握着钱袋，身体略微向后仰，下意识想要逃避。
达芬奇对这幅壁画人物心理变化的掌握极为传神，在此之前，从没有画家为了表现人物而去研究人物的心理，所以达芬奇被视为这种新观念的创始人，为世人证实“艺术家耶可以是沉思与创造的思想家，与哲学家没有两样”，这也是《最后的晚餐》之所以被称为旷世杰作的原因之一。
因为是画在餐厅里，《最后的晚餐》还没有完成就出现了龟裂，300年后拿破仑入侵意大利，又把这个餐厅当做马厩，第二次世界大战中修道院又多次遭到轰炸，而今，这件稀世珍宝已面目难辨。
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