高效液相色谱有几种定量方法？其中那种是比较精确的定量方法？并简述？

Question

如题所述

Answer 1

色谱定量分析是根据组分检测响应讯号的大小，定量确定试样中各个组分的相对含量。其依据是：每个组分的量(重量或体积)与色谱检测器产生的检测响应值(峰高或峰面积)成正比。具体到特定方法，主要有下列方法：
1.归一化法
当样品中所有组分能全部流出色谱柱，并在检测器上都能产生相应信号（得到色谱峰）时，常采用归一化法。
Ci = mi/m×100％ = fi•Ai /Σ fi•Ai ×100％
* 优点：简单方便， 不受进样量及操作条件波动的影响
* 缺点：所有组分都必须出峰， 每个组分都必须有校正因子

2.外标法（又称标准曲线法）
配制已知浓度的标准样品进行色谱分析，测量各组分的峰面积或峰高，作峰面积(或峰高)和浓度的标准曲线，然后在与标准样品分析相同操作条件下，进入相同量(一般为体积)的未知样品，测得被分析组分的峰面积（或峰高），在标准曲线上即可查得相应的浓度。
在工厂的日常控制分析中大多数采用这种方法，分析结果的准确性主要取决于进样量的重复性和操作条件的稳定性。
Ci = mi/m×100％ = fiAi/m×100％
* 校正：标准曲线、两点法、单点法

* 优点：简便、无需所有组分都出峰（校正因子），经常用于几个组分的分析
* 缺点：操作条件波动的影响较大,进样量影响大

3.内标法
由于吸附或化学反应等原因，色谱柱不能使所有的组分都流出来，或者各组分都能流出，但检测器不能对所有组分都给出相应的色谱峰，或者有的样品含量过大（得不到完整的峰），或者过小，或者只要求定量分析复杂样品中几个组分，均可采用内标法。
过程：在总量为m样品中如入质量为mS的内标物S，然后根据被测物和内标物的重量和在色谱图上相应的峰面积比求出某组分i,的含量
mi/ms = fiAi / fsAs
Ci = mi/m ×100％

= fiAi ms / fsAs m×100％

* 优点：不需所有组分都出峰（校正因子），操作条件和进样量基本无影响
* 缺点：内标物难找－－稳定无反应、结构性能，相似、保留时间内插并完全分离
* 注意：内标法比较适用于低含量组分的分析， 一般选作内标物的物质，最好在样品中不存在，其保留值在所有组分保留值的中间，加入内标物的含量和待测组分含量不应相差很大。

4.叠加法（内加法）

内加法适用于较特殊的情况：图谱上没有适当位置可插入内标峰，或因各种条件限制无合适的内标物时。
此时可先以样品出一张图，再在样品中加入一定量被测组分后再进样，看峰面积增加了多少，由此比例来求出原始含量。

Answer 2

峰面积法、峰高法、归一法、外标法。峰面积法是比较精确的定量方法

简介：

高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。它是在生化和分析化学中常用的柱层析仪。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法有效方便快捷地解决化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中得出想要的数据，成为重要的分离分析技术。

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Answer 3

高效液相色谱（HPLC）是一种常用于化合物分离、鉴定和定量的技术。在HPLC中，根据检测器的类型和分析的目的，可以采用多种不同的定量方法，主要包括：
一、外标法
这是最常用的定量方法。它涉及使用已知浓度的标准品来创建一个校准曲线。然后，通过比较样品的峰面积或峰高与校准曲线来计算未知样品中的化合物含量。外标法适用于样品处理简单且矩阵影响较小的情况。
二、内标法
在这种方法中，向样品中加入一个已知浓度的内标物质。内标应与分析物化学性质相似，但在色谱上能够明显区分。内标法可以补偿样品制备和分析过程中可能发生的变化，因此在处理复杂样品矩阵时非常有效。
三、标准加入法
这种方法适用于样品矩阵效应显著，即样品本身的成分会影响待测组分信号强度的情况。通过在样品中加入一系列已知浓度的标准品，测量每次加入后待测组分的响应增量，从而计算出样品中原始的组分浓度。这种方法可以有效地校正由样品矩阵效应引起的误差。
四、面积归一法
这种方法假设混合物中所有组分的检测响应因子相同。它通过计算每个组分的峰面积与总峰面积的比例来确定组分的浓度。
在这些方法中，内标法通常被认为是最精确的，特别是在处理复杂基质或样品制备过程中容易发生损失的情况下。内标法能够有效地校正实验过程中的变异，从而提高结果的准确性。