高中生物选择一道压轴题 非常不解 请指教一二！！【重金悬赏】

Question

4.(2013湖州二模)MseⅠ、PstⅠ、EcoRⅠ三种限制酶的识别序列及切割位点分别是:
GAAT↓TAATTC,C↓TGCAG,G↓AATTC,下图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切点。 若要用上图质粒和外源DNA构建重组质粒,需要对质粒进行改造,构建新的限制酶切位点。在构建新的限制酶切位点的过程中需要使用的酶是（？）

A限制酶PstⅠ、DNA连接酶、DNA聚合酶
B.限制酶EcoRⅠ、DNA连接酶、DNA聚合酶
C.限制酶EcoRⅠ、限制酶PstⅠ、DNA聚合酶
D.限制酶PstⅠ、限制酶EcoRⅠ、DNA连接酶

Answer 1

答案是B。此题主要考查基因工程中有关限制酶、连接酶、粘性末端等知识。
D①图2中获得目的基因用2种不同的限制酶；②对“对质粒进行了改造，构建新的限制酶切位点”这句话的理解：在质粒中已有PstⅠ酶切位点，但没有MseⅠ的酶切位点，但根据MseⅠ、EcoRⅠ的识别序列及切割位点可知，可对EcoRⅠ识别序列进行改造，即通过DNA连接酶、DNA聚合酶的作用，使EcoRⅠ识别序列变为MseⅠ的识别序列。