纯干货：目的基因PCR扩增——构载体第一步

Question

如题所述

Answer 1

PCR扩增作为构建载体的重要步骤，其核心是利用聚合酶在不同温度控制下的反应。PCR仪作为温控设备，能够精确调节变性、复性和延伸温度。

实验准备阶段，需要以下材料和设备：酵母高拷贝质粒DNA模板、PrimeSTAR Max Premix（2X）酶混合物（详情见takarabiomed.com.cn/Pro...），一对引物（F-primer和R-primer），ddH2O，琼脂糖，SYBR green核酸染料，1x TAE缓冲液，DNA marker等。此外，移液枪、离心管、离心管盒、冰盒、制胶模具、锥形瓶、量筒、天平等基础实验耗材和仪器，如离心机、涡旋仪、PCR仪以及电泳仪也必不可少。

具体操作分为四步：首先，准备PCR体系，将模板、引物、酶混合液等加入离心管，轻轻离心混合。然后，设定PCR仪的变温程序，进行扩增，最后低温保存或检测。引物的选择和设计需根据实验目的，例如同源重组构建载体，有特定的设计方法，详情链接见文末。

PCR产物的检测通过1%琼脂糖凝胶电泳实现。制作凝胶、倒胶、上样、电泳以及观察结果的步骤中，需要注意温度控制和操作技巧，如枪头插入深度、胶液冷却后的混匀和电泳电压等。完成电泳后，使用透射仪观察绿色条带，确认产物。

最后，对于对构建载体有兴趣的同学，这篇文章提供了一个实用的指南。我是一名分享和交流的中药学博士，期待你的思考和互动。祝科研顺利，万事如意！