插入突变是怎样分离克隆目的基因的?

如题所述

获得突变体进行未知基因的克隆是常用的方法之一,如T-DNA标签法和转座子诱变分离克隆目的基因的例子。

T-DNA标签法是将T-DNA在任何感兴趣的基因处产生插入性突变,获得分析该基因功能的对照突变体,它将T-DNA左右边界之间携带的外源报告基因片段作为一个选择性的遗传标记,因为插入的序列是已知的,因而对获得的转基因重组突变体就可以通过各种克隆和PCR策略加以研究。

倘若将35S强启动子在T-DNA整合到宿主基因组后,整合到内原基因的上游,则可以产生异常增加或表达的时空特异性改变而破坏基因的表达的效果,有获得性突变和功能丧失性突变等。转座子标签法是将一株携带有功能性转座系统的植物与遗传上有差异的同种植物杂交,因转座因子插入到某一特定的基因序列而破坏了该基因编码的蛋白,进而导致可见的表性的破坏或改变,这样就可以在产生后代中筛选出新型的突变体,进而分离出感兴趣的目的基因。

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