MMP4是什么？如何设计提取和分离的实验？

Question

如题所述

Answer 1

MMP-4（小鼠基质金属蛋白酶4）是一组锌离子依赖性内肽酶，MMP-4是细胞外基质（ECM）降解过程中必不可少的酶,几乎能降解细胞外基质的所有成分。

实验方法：
1.在试管中加入4ml液体培养基及4微升Amp，取菌体冰溶液少许加入其中，于37℃170rpm摇半小时后取出。
2.将活化的菌液取出4微升，涂在含Amp的平板上，于37℃温箱中培养过夜（约15h）。
3.挑取一个小单斑（用枪头），加入含5ml培养液和5微升Amp的试管中，于37℃170rpm摇过夜。
4.将试管内菌液加入到250ml培养液中（含250微升Amp），再加入2.5ml蔗糖，于37℃振荡培养至OD595=0.4-0.5，时间大约三小时。
5.在锥形瓶的菌液中加入200微升ZnCl2与250微升IPTG，使其进行诱导表达（制造包涵体需要3小时，不制造则诱导半小时）。
6.将诱导后的溶液离心，收集菌体8000rpm×15min，包涵体用15ml 20mM Tris-HCl(pH7.5)溶解。
7.将菌体溶液超声破碎，持续15min，超声5s，再停留5s，强度25%。
8.将超声液离心12000rmp×10min，沉淀用洗包涵体溶液洗涤，每次用10ml，悬后离心12000rmp×10min，洗3次。
9.再将洗包涵体溶液稀释10倍，再洗3次包涵体。
10.最后将沉淀用1ml pH=7.5 20mM Tris-HCl,重悬保存。
11.用含20mM Tris-HCl，0.5M NaCl，8M尿素，pH7.5的平衡缓冲液平衡镍螯合柱。
12.将悬浮的沉淀样品离心（10000×10min），将沉淀用上述缓冲液溶解，溶液离心，吸取上清溶液上柱。用含不同浓度咪唑的缓冲液（分别含20mM 50mM 100mM 300mM咪唑）洗柱，以OD280监测，收集各洗脱峰，并进行标记。
13.用含用6M尿素，4M尿素，2M尿素，0M尿素的外透液分布透析洗脱样品以除去尿素。防止环境改变太快蛋白失活。
14.检测活性