层析柱纯化抗体前一定要硫酸氨沉淀吗

Question

如题所述

Answer 1

硫酸铵可能会损坏某些蛋白。加入硫酸铵晶体时应小心：局部浓度过高可能会造成不需要的蛋白沉淀。
对于常规可再生的纯化过程，可以避免使用硫酸铵沉淀以利于层析。
通常沉淀对于浓度低于1mg/ml的蛋白几乎无效。

沉淀所需溶液：
饱和硫酸铵溶液（在100ml蒸馏水中加入100g硫酸铵，搅拌溶解）。
1M Tris-HCl，pH 8.0
用于第一步纯化的缓冲液。

方法：
1，过滤（0.45μm膜）或离心样品（4°C 10000g）。
2，每10倍体积的样品中加入一倍的1M Tris-HCl，pH 8.0以维持pH值。
3，温和搅拌。逐滴加入硫酸铵溶液，最高至50%饱和度。搅拌1小时。
4，10000g离心20min。
5，去除上清，用等体积相同浓度的硫酸铵溶液（如不能溶解沉淀也不会造成进一步沉淀的溶液）洗涤重悬沉淀两次。再次离心。
6，使用少量体积后面步骤所需的溶液溶解沉淀。
7，硫酸铵在净化/更换缓冲液步骤中使用脱盐柱除去。