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DNA酶切之后,产物直接电泳,胶回收之后的产物中酶还有活性吗
如题所述
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推荐答案 2017-03-25
1. 首先确认PCR产物,取一小部分PCR产物跑胶. 2. 如果产物良好,一个特异性很强的条带,则用过柱的方法提纯(就是你平时用的从溶液中纯化DNA的试剂盒就可以).楼上说的跑胶后再提,早就过时了.效率很低. 3,提纯加入限制性内切酶缓冲液,酶.按照平时的方法反应就可以了. 4. 酶切后再过柱提纯就可以了.
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酶切回收后,电泳
弥散的问题
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回收前的条带比较清晰的话说明酶切产物没问题
,你提到了盐浓度的问题,事实上样品盐浓度的确会对电泳影响很大,跑出来就会歪歪扭扭又弥散。如果真的想看回收得怎么样,那回收洗脱样品的时候可以用水来洗脱,这样盐浓度就没那么高了,对电泳影响也比较小。
1、为什么质粒
酶切产物
需要
电泳后
再
胶回收,
而不是
直接
进行酶连
答:
1、分离和纯化:电泳能够有效地将
酶切产物
分离,通过凝
胶电泳
可以将不同大小的
DNA
片段分开。胶回收则能够进一步纯化所需的DNA片段,去除存在的杂质和小片段。2、去除残留的酶:在酶切反应中
,酶
会与DNA片段结合或残留。通过电泳和
胶回收,
可以去除这些残留的
酶,
防止它们干扰后续的酶连反应。3、提高酶连...
DNA电泳
条带为什么有时候跑不开呢
答:
建议用原模板进行PCR,如果担心PCR 量较少,可同时扩增几管(最后回收成1 管),如果 PCR 产物较纯(无非特异性杂带),则可以直接采用纯化,相对于
胶回收,
可以减少损失。如果PCR 产物可能存在突变,混在一起后会比较麻烦,你可以就一管回收下来,先连T 克隆,在进行后续载体的构建。PS:做T 克隆...
酶切
完载体不实用
回收
纯化试剂盒,可以跑
电泳
图不
答:
酶切
完载体不实用回收纯化试剂盒,可以跑电泳图,因为这个时候的没切完载体,不使用
回收,以后
在试剂盒里面是可以二次利用的,因为
酶的活性
并没有完全的丧失,所以说可以跑电泳图
DNA酶切后电泳,
条带呈复带的原因
答:
那么很有可能是因为pcr产物纯化时有杂带污染,一开始跑胶的时候看不出来,后来你回收浓缩再加上
酶切,
再跑
电泳的
时候就出现了两条极近的带。其实将这两条带回收(上面那条是目的条带的可能性要大些),进行连接,只要操作和实验条件好的话,菌落的阳性率也挺高的,因为是双酶切连接。
急求!!
DNA
测序的问题
答:
(3) DNA制备过程中用核糖核酸
酶
处理所产生核糖核苷酸,虽然它们在
电泳后DNA
样品的前面,并不能观察到,但它们仍会有260nm光吸收。 (一)测序反应: 1. 对于每组测序反应,标记四个0.5ml eppendorf管(G、A、T、C)。每管加入2ml适当的d/ddNTP混合物(d/ddNTP Mix)。各加入1滴(约20ml)矿物油,盖上盖子保存于冰上...
载体
酶切产物电泳
时检测胶上有条带
,回收胶
上却降解了,请教各位大虾这是...
答:
建议用新胶,新TBC(TAC)重新跑一次,样品用醋酸铵重新纯化
,电泳
槽用缓冲液冲洗多次再用。另外可以在电泳槽周围放冰,降低电泳温度,并适当调低电压,因为高温对核酸降解也有促进作用。按你说的
酶切
结果清晰
,回收
反而降解,不是很常见,应该是混入内切酶的原因,另外,你也要检查一下
回收胶的
浓度。
DNA酶切产物
再纯化
后电泳,
怎么看起来变
答:
DNA酶切产物
再纯化
后电泳,
怎么看起来变长了 你做
胶回收的
那个柱子,只吸附DNA,就算有蛋白和其他杂质也在胶回收步骤中洗掉了,转化效率低一般不会是这个原因.你先看看这些步骤有没有需要优化:1.连接体系:粘末端是否匹配,载体与片段的比例、多少,Buffer
,酶
量,等等,可以参照连接酶的说明书.2.转化体系:...
DNA
为什么要
回收
答:
要
回收的DNA
说明是有用的。例如,通常经过
酶切
的DNA分子要进行凝胶
电泳,
将杂带和你要的条带区分看,并把你要的那部分
回收,
充分除盐,以进行后续的DNA连接等操作。再如,经过PCR扩建的基因片段也是要进行凝
胶电泳
并回收的。因为PCR
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除了你要的基因片段之外
,还有
模板、primer、错配片段等不需要...
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