跑total RNA urea page 用多大浓度的胶？

Question

浓度和电压求详细告知啊

Answer 1

以biorad mini protean III为例.
8M urea, 0.5xTBE, 5%(1:19)bis-AA:AA. 取10ml于15ml falcon tube, 平衡到室温或37度.
加入100ul 10% AP(过硫酸铵), 4ul TEMED, 颠倒混匀一分钟.
倒胶,插梳子,置于阳光下一个小时.
将300ml 0.5xTBE 预热到60度.
卸胶,取梳子,用ddH2O冲洗梳孔,用滤纸吸干孔内余液.
上电泳槽,用预热好的TBE进行预电泳,250v,20min.
PAGE Loading buffer: 80% deioned formamide, 10mM EDTA, BPB & XCY.
将样品5ul 与5ul loading buffer 混合, 70度五分钟.冷至4度,立即上样.
预电泳完毕,用1ml枪吹打PAG胶上样孔之urea,立即上样(不超过5ul,100ng-1ug).
250v电泳15-20min, 至BPB正好走出.
卸下玻璃板,以ddH2O冲洗至温度降至室温.卸胶.
染色, EB or SYBR gold or gelstar or silver stain.