1. 染色原理:正常活细胞因胞膜结构完整,能排斥台盼蓝,阻止其进入细胞内。相反,死细胞或胞膜受损细胞,胞膜通透性增加,台盼蓝可进入并染色细胞成蓝色。通常,细胞膜完整性丧失被视为细胞死亡的一个标志。因此,台盼蓝染色法能快速区分活细胞和死细胞。
2. 台盼蓝拒染法:此方法基于台盼蓝只能染色死细胞,而不能染色活细胞的特点,用于快速检测细胞存活率。
3. 流程:
- 调整细胞浓度至1~10×10^6细胞/ml,并在96孔板中接种100 μl细胞/孔。
- 培养细胞24小时后,进行不同处理,并设置三个平行对照。
- 收集细胞,使用台盼蓝进行染色,并在倒置显微镜下计数蓝染与未染色细胞,以计算细胞存活率。
- 结果统计:通过显微镜观察,死细胞呈淡蓝色,而活细胞不被染色。细胞活力的计算公式为:活细胞率(%)= 活细胞总数 /(活细胞总数 + 死细胞总数)×100。
4. 注意事项:在使用台盼蓝染色细胞时,需要注意染色时间不宜过长,以免活细胞也被染色,从而干扰计数结果。
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