台盼蓝染色的原理和步骤

Question

如题所述

Answer 1

1. 染色原理：正常活细胞因胞膜结构完整，能排斥台盼蓝，阻止其进入细胞内。相反，死细胞或胞膜受损细胞，胞膜通透性增加，台盼蓝可进入并染色细胞成蓝色。通常，细胞膜完整性丧失被视为细胞死亡的一个标志。因此，台盼蓝染色法能快速区分活细胞和死细胞。
2. 台盼蓝拒染法：此方法基于台盼蓝只能染色死细胞，而不能染色活细胞的特点，用于快速检测细胞存活率。
3. 流程：
- 调整细胞浓度至1~10×10^6细胞/ml，并在96孔板中接种100 μl细胞/孔。
- 培养细胞24小时后，进行不同处理，并设置三个平行对照。
- 收集细胞，使用台盼蓝进行染色，并在倒置显微镜下计数蓝染与未染色细胞，以计算细胞存活率。
- 结果统计：通过显微镜观察，死细胞呈淡蓝色，而活细胞不被染色。细胞活力的计算公式为：活细胞率（%）= 活细胞总数 /（活细胞总数 + 死细胞总数）×100。
4. 注意事项：在使用台盼蓝染色细胞时，需要注意染色时间不宜过长，以免活细胞也被染色，从而干扰计数结果。