蛋白质分离纯化的一般程序是什么?

Question

如题所述

Answer 1

【答案】：要对任一组织或细胞的蛋白进行研究，首先必须使目的蛋白和其他蛋白或非蛋白成分分离，也就是进行分离和纯化。分离纯化的总目标为：增加制品的纯度或提高比活性；保持样品的生物学活性；使收率达到最高。
分离纯化的一般程序是：
(1)前处理，选择适当的细胞破碎方法和适宜的提取介质，将蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来，并保持生物活性。
(2)粗分级，建立一系列分离纯化的方法，使目的蛋白与其他较大量的杂蛋白分开，常用的有盐析、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等方法。
(3)细分级，选择一套适宜的方法，进一步将目的蛋白与少量结构类似的杂蛋白分开，最终使纯度达到要求，常用的有各种层析、电泳及离心等方法。
(4)结晶，结晶本身也是进一步提纯的过程，由于结晶中从未发现过变性的蛋白质，因此蛋白质结晶可用来断定制品是否处于天然状态。