培养料是双孢蘑菇生长好坏的前提，选择好的配方，进行科学堆制，提高其转化率，是双孢蘑菇高产、稳产的基础。培养料的配方最好选择天然的粪草培养料配方：麦草或稻草1000kg，粪（鸡粪和猪粪）1000kg，过磷酸钙20～25kg，石膏粉15～20kg，生石灰20kg，尿素10kg，草木灰20kg。
（1）第1次发酵（前发酵） 先将麦秸淋湿或浸泡，使含水量达70%左右，粪肥要晒干，提前打碎、堆闷2～3天，并喷药杀虫。一般将料堆成长方形，宽1.8～2.0m，高1.5～1.8m，顶部为龟背形。先堆一层麦秸，厚20cm，再撒一层粪肥及辅料，以后一层麦秸一层粪肥及辅料，建堆至所需高度。从第3层起，视水分情况，边堆边加足水分，一般下层少加，上层多加。最上层用干麦秸或草帘盖好，遇雨天要盖上塑料薄膜，雨后揭掉，以利通风。建堆第6天，进行第1次翻堆，再过5天进行第2次翻堆，以后每3～4天翻堆1次，共4～5次。翻堆时一定要把上层、外层和底层的料翻到中间，把堆中间的翻到上层、外层和底层，每次翻堆时还要视料情况补足水分，以保证发酵的质量。
（2）二次发酵（后发酵） 为防止棚内存在病菌、虫卵，引发大量病虫害，进料前应先对棚内消毒1～2次。首先对棚内喷洒800倍的辛硫磷乳油杀死地下虫卵，然后按每20m2用0.5kg甲醛溶液薰蒸杀菌。方法是在棚内放煤火，每1kg甲醛加1kg水加热薰蒸，结束后打开通风口通风，无甲醛气味即可进料。第1次发酵后，将原料迅速移入棚内一个畦床上（应在一天内完成），利用这个季节的高温，再加上塑料棚的升温，使棚内温度迅速上升到50～55℃，保持此温度并维持3～5天，进行二次发酵。结束后，进行大通风换气降温，待温度降至28℃以下时，调节pH值及含水量至适宜，即可把原料在畦床上铺开，料厚20～25cm，待播。 覆土后15～20天，应控制菌丝生长，促进原基形成。温度控制在14～18℃，空气相对湿度保持90%左右，此时应重喷结菇水，每天2～3次，每次每m2喷0.8kg水为宜。夜间连喷2次，喷水后大通风。温度应控制在15～20℃，3～5天后子实体形成。待子实体长到黄豆大小时，再喷1次保质水。喷保质水采用轻喷勤喷的方法，保持覆土粒能捏扁、不粉碎、不粘手为准。子实体长到2～4cm时即可采收。采后停水1～2天进行清床补土，然后调湿，喷转潮水。为使子实体生长健壮、高产稳产、增强抗病性，在子实体生长期间要适当追肥，以蘑菇健壮素1号、2号为好。
