制菌种的关键步骤主要包括两个部分：灭菌和接种。
灭菌是制菌种过程中至关重要的一步。在微生物培养中，杂菌的存在会严重影响菌种的纯度和质量。因此，必须对培养基和培养皿进行严格的灭菌处理，以消除杂菌的污染。常用的灭菌方法包括干热灭菌、高压蒸汽灭菌和灼烧灭菌等。这些方法能够有效地杀死培养基和培养皿表面的微生物，保证菌种的纯度。
接种是制菌种的另一个关键步骤。接种是将目的菌种接入已经灭过菌的培养基中的过程。这个过程中需要注意无菌操作，避免杂菌的污染。同时，接种的方法也会影响菌种的生长和繁殖。常用的接种方法包括划线接种、涂布接种和穿刺接种等。这些方法适用于不同类型和数量的微生物培养。
为了确保菌种的存活和生长，还需要对菌种进行适宜的培养条件的选择和优化。这包括控制温度、湿度、pH值、培养基成分等参数，以满足菌种生长繁殖的需求。同时，对于一些特殊类型的微生物，还需要采用特殊的培养方法和技术，如分批培养、连续培养和固定化培养等。
菌种传代的具体操作步骤：
1、菌种传代是指将特定的菌种在实验室中进行培养和繁殖的过程，通过不断的传代可以保持菌种的纯度和活力，为后续的实验提供可靠的菌株资源。
菌种选择：根据实验需要选择合适的菌种，并确保菌种的来源可靠，避免使用已污染或变异的菌株。
2、培养基准备：根据菌种的需求准备适当的培养基，包括固体培养基和液体培养基，以满足菌种在不同生长阶段的需求。
a.准备菌种：从保存的菌株中取出适量的菌种，避免直接从冷冻保存中取用，可以先在无菌条件下进行预培养。
b.接种培养基：将菌种接种到培养基中，可以选择液体培养基或固体培养基，根据需要进行选择。
c.培养条件：根据菌株的要求，控制好培养的温度、湿度和光照条件，有些菌株需要特殊的培养条件。
d.观察生长：培养一段时间后，观察菌株的生长情况，如是否出现菌落、菌落的形态和颜色等。