trizol法提取血中的RNA，怎样做量会更多

Question

谢谢！提完RNA加DEPC水后放-80度也会容易讲解吗？

Answer 1

1 血要新鲜。如果是冻存的，在解冻时要完全，之后再加Trizol。
2 可以稍多加一些Trizol，少加些血。混匀之后放置10分钟左右，直接加三氯甲烷，混匀再去离心。
可以不用先离心去沉淀之后再加三氯甲烷。
3 每个步骤操作要快，用的时间药短些，防止降解
4 异丙醇沉淀的时候，放-20°C的冰箱半个小时，或再适当延长一点时间。迅速离心，之后加75%乙醇。只洗一遍，洗2遍易损失部分RNA。
5 不要过分干燥，管内稍有点残余的乙醇也没关系。干燥一会就迅速加DEPC水少量。一般我都加的30.如果需要浓度高点可以少加水。
6 提取RNA之后迅速反转录成cDNA再保存。
RNA直接冻存会降解。也会影响以后反转的效率。

Answer 2

从原理上来讲不会。但是核酸溶液反复冻融后容易被破坏。如需反复使用，且条件允许，可在4度条件下短暂保存，不要过夜。