CTAB法步骤

Question

如题所述

Answer 1

以下是CTAB法的详细步骤，以帮助您更好地理解和操作：

首先，将2%的CTAB抽提缓冲液在65℃的水浴中预热，确保其达到适宜的温度。

接着，取大约300毫克的实验材料，将其研磨至粉末状，使用液氮冷冻处理以提高提取效率。

然后，在粉末中加入700微升的2% CTAB抽提液，轻轻搅拌以确保CTAB与样本充分接触。

将混合物倒入1.5毫升的灭菌离心管中，大约填充管子的三分之二高度，然后放入65℃的水浴或恒温箱中。每10分钟轻轻摇动一次，持续30到60分钟，以提取DNA。

在30分钟的提取过程中，冷却样品2分钟。随后，加入氯仿-异戊醇（24：1）至管满，以帮助分离DNA。注意，如果是提取总基因组，此时应避免剧烈震荡。摇动混合均匀后，离心10分钟，同时准备一个新离心管加入600微升异丙醇。

离心后，移除上清液，将剩余液体转移到含有异丙醇的离心管，轻轻上下摇动30秒，使DNA沉淀与异丙醇充分混合。

再进行一次10000 rpm的离心，将液体倒掉，注意不要丢失DNA沉淀，将离心管倒置在纸巾上，静置60秒。

接着，直立离心管，加入720微升的75%乙醇和80微升5 M醋酸钠，轻轻转动并弹动管尖，让DNA沉淀浮起，其余杂质溶解。

静置30分钟，让DNA沉淀充分分离后，重复离心步骤，再次用75%乙醇洗涤，确保去除杂质。最后，离心30秒后，倒掉液体，自然风干或用风筒吹干DNA。

将干燥的DNA加入50微升0.5 × TE（含RNase）缓冲液中，置于37℃恒温箱中，让RNA完全分解，溶解DNA。根据具体实验材料，可能需要根据情况进行适当的步骤调整，以获得最佳实验结果。