第1个回答 2024-06-16
在使用分光光度法测定铁含量时，实验步骤中加入的各种试剂都有其特定的作用。首先，还原剂，如盐酸羟胺，其主要任务是将铁离子从三价（Fe3+）还原为二价（Fe2+），这是因为二价铁与显色剂邻二氮菲能够形成稳定的桔红色配合物[Fe(phen)3]2+，而三价铁形成的淡蓝色配合物[Fe(phen)3]3+则不如二价铁稳定。盐酸羟胺的存在确保了铁的二价状态，为后续的显色反应创造条件。
然而，如果在添加还原剂后立即加入邻二氮菲，铁三价离子会先与之结合，形成不稳定的络合物，导致测定结果不准确。因此，还原剂必须先于显色剂加入。此外，为了避免二价铁在反应过程中被氧化，影响测量的准确性，盐酸羟胺还起到了保护二价铁的作用，氧化还原反应中，维生素C（抗坏血酸）也可替代盐酸羟胺起到类似效果。
在实验过程中，还有几个注意事项需要遵循。例如，运输和储存分光光度法试剂时，应保持适宜的温度，防止酶活力下降。特别是溶菌酶，需要在-20℃保存，温度过高可能导致酶活性降低。同时，制作培养基时需控制好温度，避免成分结块沉淀。在测定活力时，底物溶液浓度不宜过高，以免细菌菌体沉淀影响吸光度读数。
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