双缩脲法测定蛋白质含量的干扰因素有哪些

Question

谢谢了

Answer 1

1、碱性环境：

在使用双缩脲试剂时候，必须注意，必须是先加0.1 g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01 g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜溶液，再加入氢氧化钠溶液，则无法充分制造碱性环境，此时硫酸铜会与氢氧化钠发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的。

2、蛋白质浓度：

双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。

扩展资料

双缩脲法的实验原理：

双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中，双缩脲与二价铜离子形成紫色络合物，称为双缩脲反应。凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能够以一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。

紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。

此法的优点是较快速 ，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。主要的缺点是灵敏度差，不适合微量蛋白的测定。

参考资料来源：百度百科-双缩脲法

参考资料来源：百度百科-双缩脲试剂

参考资料来源：百度百科-蛋白质测定

Answer 2

双缩脲法灵敏度较低1~20mg，实验时间20~30min，干扰物质有硫酸铵，TRIS，部分氨基酸。主要用于快速测定，但是不太灵敏，不同的蛋白质显色相似。可以试试Lowry法本回答被提问者采纳

Answer 3

该实验中类脂及色素对比色有干扰，可以用CCL4清除干扰。