现有的HPLC方法用于LC-MS分析时，应注意哪些问题?

Question

如题所述

Answer 1

【答案】：欲将现有的HPLC方法移植到LC/MS的分析测定中，可以从以下几方面考虑。
①流动相。由于盐对质谱的损伤很大，故在流动相的选择上，需避免使用不可挥发性盐，尽量少使用可挥发性盐。故一般离子对色谱和离子抑止色谱方法的流动相是不能直接用到液一质上的。对于ESI，需要考虑基质效应，对于正模式的方法，流动相的pH值最好小于6.0，以提高离子化效率，同时不能在流动相中添加TEA等表面活性剂；对于负模式，pH值最好大于8.0，同时，流动相中不能加入容易形成酸根负离子等物质(TFA，HAc)。对于APCI，对流动相的限制相对较ESI小。从HPLC方法到LC-MS上，改动最大的可能就是流动相。
②流速。由于质谱部分对流速限制较大，对于ESI，一般不超过0.5mL/min，对于APCI，一般不超过1.0mL/min。在控制流速上，可以在紫外检测器(或色谱柱)后，用三通分流来相对减少进入质谱的流量。故参考HPLC液相条件时，第一要考虑的是适当减少流速，以满足质谱部分。
③色谱柱。由于流速的限制，一般液质的色谱柱采用同样填料的HPLC色谱柱，适当减少色谱柱的长度及内径，这样不改变出峰的顺序，同时使得液质结果和HPLC更接近。如果需要提高分离度，可以选用更小颗粒的填料。
④梯度或等度的影响。对于梯度方法，必须考虑到低流速时，从泵腔到色谱柱前端那部分体积对色谱条件的影响；对于等度方法，需要考虑的少一些。
⑤柱温。一般直接采用HPLC方法的柱温。