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§è¯´æ书ä¸çæä½åºè¯¥æ²¡æé®é¢ãåç°DNA污æï¼ç¨DNAse I æ¶å1å°æ¶ï¼37度离å¿åä¸æ¸
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¥1ml TRIzolï¼ç¨åæµä»ªè¿è¡åæµå¤çãæ ·åä½ç§¯ä¸åºè¶
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»æ¿é¢ç§¯èå®ï¼ä¸åå³äºç»èæ°ãTRIzolå éä¸è¶³å¯è½å¯¼è´æåçRNAæDNA污æã ⢠ç»èæ¬æ¶² 离å¿æ¶éç»èï¼æ¯5-10Ã106 å¨ç©ãæ¤ç©ãé
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¥1ml TRIzolï¼åå¤å¸æãå TRIzolä¹åä¸è¦æ´æ¶¤ç»è以å
mRNAé解ãä¸äºé
µæ¯åç»èç»èéç¨åæµä»ªå¤çã 2. å°åæµæ ·åå¨å®¤æ¸©ï¼15-30âï¼æ¾ç½®5åéï¼ä½¿æ ¸é
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¥0.2ml氯仿ï¼å§çæ¯è¡15ç§ï¼å®¤æ¸©æ¾ç½®3åéã 5. 2-8â10000Ãg离å¿15åéãæ ·åå为ä¸å±ï¼åºå±ä¸ºé»è²ææºç¸ï¼ä¸å±ä¸ºæ è²æ°´ç¸åä¸ä¸ªä¸é´å±ãRNA主è¦å¨æ°´ç¸ä¸ï¼æ°´ç¸ä½ç§¯çº¦ä¸ºæç¨TRIzolè¯åç60%ã 6. ææ°´ç¸è½¬ç§»å°æ°ç®¡ä¸ï¼å¦è¦å离DNAåèç½è´¨å¯ä¿çææºç¸ï¼è¿ä¸æ¥æä½è§åãç¨å¼ä¸éæ²æ·æ°´ç¸ä¸çRNAãæ¯ä½¿ç¨1ml TRIzolå å
¥0.5mlå¼ä¸éï¼å®¤æ¸©æ¾ç½®10åéã 7. 2-8â10000Ãg离å¿10åéï¼ç¦»å¿åçä¸åºRNAæ²æ·ï¼ç¦»å¿åå¨ç®¡ä¾§å管åºåºç°è¶ç¶æ²æ·ã移å»ä¸æ¸
ã 8. ç¨75%ä¹éæ´æ¶¤RNAæ²æ·ãæ¯ä½¿ç¨1ml TRIzolè³å°å 1ml 75%ä¹éã2-8âä¸è¶
è¿7500Ãg离å¿5åéï¼å¼ä¸æ¸
ã 9. 室温æ¾ç½®å¹²ç¥æç空æ½å¹²RNAæ²æ·ï¼å¤§çº¦æ¾5-10åéå³å¯ãä¸è¦ç空离å¿å¹²ç¥ï¼è¿äºå¹²ç¥ä¼å¯¼è´RNAç溶解æ§å¤§å¤§éä½ãå å
¥25-200μlæ RNaseçæ°´æ0.5%SDSï¼ç¨æªå¤´å¸æå 次ï¼55-60âæ¾ç½®10åé使RNA溶解ãå¦RNAç¨äºé
¶åååºï¼å¿ä½¿ç¨SDS溶液ãRNAä¹å¯ç¨100%çå»ç¦»åç²é
°èºæº¶è§£ï¼-70âä¿åã注æäºé¡¹ï¼ä»å°éæ ·åï¼1-10mgç»ç»æ102-104ç»èï¼ä¸æåRNAæ¶å¯å å
¥å°è®¸ç³å以ä¿è¿RNAæ²æ·ãä¾å¦å 800ml TRIzolåæµæ ·åï¼æ²æ·RNAåå 5-10μg RNase-freeç³åãç³åä¼ä¸RNAä¸åæ²æ·åºæ¥ï¼ç³åæµåº¦ä¸é«äº4mg/mlæ¯ä¸å½±å第ä¸é¾çåæï¼ä¹ä¸å½±åPCRååºãåæµåå 氯仿ä¹åæ ·åå¯ä»¥å¨-60è³-70âä¿åè³å°ä¸ä¸ªæãRNAæ²æ·å¯ä»¥ä¿åäº75% é
ç²¾ä¸2-8âä¸ææ以ä¸æ-5è³-20âä¸å¹´ä»¥ä¸ãåå±åRNAæ²æ·æ¶ä¹å¯ä½¿ç¨å°å¼ç¦»å¿æºï¼2600Ãg离å¿30-60åéãé¢æ产éï¼1mgç»ç»æ1Ã106ç»èæåRNAåå«ä¸ºï¼èåè¾6-10μgï¼è¾3-4μgï¼éª¨éª¼èåèç»ç»1-1.5μgï¼èç1-4μgï¼ä¸ç®ç»è8-15μgï¼æ纤维ç»è5-7μg ã
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