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在包涵体蛋白的变性与复性实验中,最有可能用到以下哪种实验技术
如题所述
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推荐答案 2017-05-07
包涵体外源基原核细胞表达尤其肠杆菌高效表达形由膜包裹高密度、溶性蛋白质颗粒显微镜观察高折射区与胞质其明显区别
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包涵体变
复性包涵体变性
答:
在包涵体变复性过程中,
首先通过破菌基因工程菌发酵液离心浓缩,处理方法多样,包括机械破碎和超声破碎
。超声破碎在菌量较少时效果较好,但大体积悬液中能量传递和局部产热问题导致其应用受限,可能导致未破碎细胞与包涵体混杂。因此,大规模纯化时,一般采用溶菌酶先破碎细胞膜,再结合超声破碎,以提高包涵体纯...
如何对
包涵体蛋白
进行表达
与复性
答:
包涵体的复性目前常用的主要有两种方式:
1,稀释溶液,但是操作的液体量大,蛋白稀释;2,透析,超滤或电渗透析去除变性剂
。1.包涵体的稀释复性 设定不同的复性条件:蛋白质量浓度、尿素浓度、温度、氧化还原条件、加入Ttiton X-100与环糊精的量、复性时间等,使变性溶解的包涵体稀释复性,复性一定时间后取...
包涵体的实验
方法
答:
1、共溶剂:如PEG6000-20000
,据说可以可逆的修饰折叠中间体的疏水集团,此外由于阻止了蛋白质分子间的相互接触的机会,也可能对复性效率的提高起作用。一般的使用浓度在0.1%左右,具体条件可根据实验条件确定。2、二硫键异构酶(PDI)和脯氨酸异构酶(PPI):PDI可以使错配的二硫键打开并重新组合,从而有利于恢复到正常的结...
包涵体蛋白
不
变性复性
能做WB吗?
答:
可以啊
,包涵体蛋白
只是二硫键折叠不正确,并不会影响到他们与抗体结合,而且你做western的时候蛋白都是
变性
的啊(SDS-PAGE阶段)。需要做
包涵体复性的
是需要有活性的蛋白时才用(比如重组蛋白酶活性分析)。
包涵体变
复性的包涵体变性
答:
超滤复性:在生产中较多的使用,规模较大,易于对透析速度进行控制,缺点是不适合样品量较少的情况,且有些
蛋白可能
在超滤过程中不可逆
的变性
。柱上复性:是最近研究较多并成功的在生产中应用的一
种复性
方法
,包涵体蛋白
变性后,在色谱柱上
复性,
大致可分成疏水柱复性及凝胶柱复性两类。其中的凝胶柱复性均...
包涵体复性
过程
中,用
盐酸胍
和
尿素哪个好,
有什么
区别
答:
包涵体复性
过程
中,用
盐酸胍和尿素哪个好,有什么区别 ① 包涵体就是
蛋白的变性
聚集后的产物,6M盐酸胍及8M尿素是作为溶解包涵体的溶剂.② 复性的过程是逐步去除盐酸胍或者尿素,从而使得蛋白天然构象逐步形成.所以一般如果起始使用的是6M盐酸胍进行包涵体溶解,这个过程中逐步降低的是盐酸胍的浓度.
有
哪位大侠知道当目的
蛋白
以
包涵体的
形式存在是如何使其溶解?谢谢了...
答:
1.破碎细胞,分离纯化
包涵体
2.用
变性
剂溶解包涵体 3.
复性
。方法有 (1)稀释复性、透析复性 (2)色谱复性 (3)凝胶过滤复性 (4)金属螯合色谱复性 (5)亲和色谱复性 (6)其他吸附色谱方法 具体参照《生物工程下游
技术
》参考资料:生物工程下游技术 第二版 刘国诠 P74-78 ...
包涵体复性
过程有沉淀是什么原因
答:
造成该沉淀的原因和解决方法如下:1、蛋白质稳定性降低:
在包涵体复性
过程
中,蛋白质可能
会因为各种因素(如温度、pH 值、溶液成分等)发生变化,导致其稳定性降低,从而形成沉淀。解决方法:确保
实验
过程中的温度、pH 值、溶液成分等条件符合要求,以降低
蛋白质变性
的风险。2、溶液浓度过高:在复性过程中...
包涵体蛋白
纯化
与复性
所用的试剂对之后的
蛋白有
什么影响
答:
明早上还得吃鸡蛋喝牛奶在加营养快线补充
蛋白质
大家正在搜
包涵体的变性和复性
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