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为什么到现在为止还没有得到在所有温度下都缺乏5→3的外切酶活性的DNA聚合酶Ⅰ的突变株?
如题所述
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推荐答案 2023-04-21
【答案】:大肠杆菌DNA复制过程中合成的RNA引物由DNA聚合酶Ⅰ所具有的5'→3'外切酶负责切除。当DNA聚合酶Ⅰ丧失其内在的5'→3'的外切酶活性以后,DNA复制中合成的RNA引物就不能被有效地切除,这必然导致冈崎片段的积累,新合成的DNA无法形成连续的链。这样的突变株是无法繁殖生存的。所以到现在为止,还没有得到在所有温度下都缺乏5'→3'的外切酶活性的DNA聚合酶Ⅰ的突变株。
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DNA聚合酶
中
5
'
→3
'
外切酶活性
是
什么
意思
答:
外切,简单地说就是从外面切,
外切酶
是不识别序列的,它从
DNA
(有5‘端和3’端)的5‘端,一个一个的往下切脱氧核苷酸。 与之对应的是内切酶,就是从DNA内侧切,要识别序列。
klenow大片段酶和
DNA聚合酶
之间有
什么
关系
答:
Klenow片段是
DNA聚合酶的
一种,是E.coli聚合酶I的大片断。具有DNA聚合酶I的5'-3'聚合酶活性和3'-5'
外切酶活性
,但
没有的5
'-3'外切酶活性。通常DNA聚合酶最广泛的用途是在以DNA为模板,通过PCR扩增获得大量
的DNA
序列,这种复制通常都是级数放大的。而Klenow片段则只能完成对模板的一次复制,不能实现...
说明
DNA聚合酶Ⅰ的
功能。
答:
(2)3'→5'外切活性:DNA复制过程中如果掺入的是一个错误的核苷酸时,将抑制
DNA聚合酶
I的聚合作用而引发3'→5'
的外切活性
,于是就从3'端切除最后面错配的核苷酸,聚合酶再发挥聚合作用,用正确的互补核苷酸取代已被清除的核苷酸,这种修复称为“校对”。(3)5'→3'外切活性:在随后链复制中,由于...
耐热
DNA聚合酶
高保真DNA聚合酶
答:
能有效校正扩增过程中可能出现的碱基错配,从而显著降低产物的错配率。特别之处在于,pfu产生的PCR产物末端平整,不会出现3'端的单A核苷酸突出。Vent
DNA聚合酶
则来自Litoralis栖热球菌,同样具备3'-5'
外切酶活性
,能够识别并移除错配的碱基,具有显著的校对功能,为PCR实验提供高精度的产物。
DNA聚合酶
你知多少?
答:
所谓测序酶即是修饰了的T7
DNA聚合酶
,是采用缺失的方法,从外切核酸酶结构域中除去28个氨基酸,这样使T7 DNA聚合酶完全失去了3'-5'
的外切
核酸
酶活性
,只有5'-3'聚合酶的活性,而且聚合能力提高了3~9倍,测序时常用此酶。Taq DNA polymerase:实验室最常用~ 1976, Thermus aquaticus,在...
dna聚合酶3
、聚合酶2
没有5
`-3`
外切酶活性
,rna聚合酶、逆转录酶
为什么没
...
答:
因为
DNA的
双链是反向平行的,即5`-3`和3`—5`,而RNA是单链
5
-
3
外切酶活性
和 3-5 外切酶活性有
什么
区别?
答:
以维持DNA链的连续性和一致性。总结来说,3-
5外切酶活性在
DNA复制的校对阶段发挥着至关重要的作用,如同质量控制的最后防线,确保错误被及时纠正。而5-
3外切酶活性
则是在合成过程中的一种维护机制,确保新合成
的DNA
链与模板的精确匹配。两者在不同的环节,通过各自的专长,共同维护了生命的遗传蓝图。
下列关于原核生物
DNA聚合酶
Ⅲ的叙述,错误的是( )。
答:
B项,DNA-pol Ⅲ是由10种亚基组成的不对称异源二聚体。CD两项,原核生物
DNA聚合酶
Ⅲ(DNA-pol Ⅲ)能催化3′,5′-磷酸二酯键的生成,
具有5
′→3′聚合酶活性和3′→5′核酸外切酶活性,而无5′→3′核酸外切酶活性,具有5′→3′核酸
外切酶活性的
是DNA-pol Ⅰ。
DNA
连接酶
聚合酶
答:
因此,这些产物可以利用T载体进行克隆。然而,Taq酶的一个缺点是
没有3
'→5'阅读校正功能,可能导致PCR扩增过程中产生错配,大约每30次循环会出现0.25%的错配率。为了提高PCR的准确性,可以选择使用高保真Taq酶,如Pfu。Pfu的一个显著特点是它
具有3
'→5'
外切酶活性
,这有助于减少错配问题。值得注意的...
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