小知识 | RNA提取那些事(二)

如题所述

探索RNA世界的新篇章:离心柱(试剂盒)提取法详解(二)

在RNA提取的领域,离心柱法凭借其简便性和高效性,已经成为科研实验室中的常用工具。这种方法首先通过RNase抑制剂来保护样品中的RNA,确保其在后续步骤中的完整性。样本中的核酸会在特定膜上结合,然后通过精心设计的清洗和低盐洗脱步骤,将纯净的RNA收集起来。

多种选择,针对不同样本类型
市面上的RNA提取试剂盒针对不同类型的样本进行了分类,如植物、动物组织和细菌等。让我们以植物RNA提取为例,深入了解其详细过程:

1. 精准处理:研磨后的样品中加入Buffer GRL,激活特定的裂解酶,促使RNA释放。随后,样本转移至离心柱,离心后上清液会被收集。

2. 乙醇洗脱与核酸吸附:加入乙醇后,RNA与溶液混合,再次离心,弃去乙醇,将RNA吸附至吸附柱上。

3. 去蛋白与DNase处理:去蛋白液能有效去除蛋白质杂质,而DNase I的加入则确保DNA的去除,这是RNA纯化的关键步骤。经过数次漂洗和重复处理,以达到最佳纯度。

4. 干燥与RNA释放:干燥吸附柱后,用ddH2O洗脱RNA,最后得到纯净的总RNA。

高效磁珠法的新突破
Genesand的高效植物总RNA提取试剂盒采用了磁珠分离技术,利用超磁性纳米磁珠的特性,可有效结合并分离RNA,无论是植物还是多种类型的样本,都能轻松应对。

对于动物RNA提取,磁珠法同样简洁高效:

1. 准备样本:无论是悬浮细胞还是贴壁细胞,只需确保足够的细胞数,如50-100万,然后进行适当裂解或组织研磨。

2. 结合与磁珠分离:与等体积的结合液混合后,RNA会与磁珠结合,磁珠上的杂质则会被吸除。

3. 去DNA和洗涤:磁珠洗涤后,可选择消化步骤去除残留的DNA。再次洗涤确保纯净度。

4. 释放与保存:让剩余液体自然挥发,然后用洗脱液将RNA释放,最后磁珠分离,得到纯净的RNA。

下期内容将深入探讨不同RNA提取方法的比较,以及可能遇到的问题及解决方案,敬请期待!
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