MTT法MTT 溶液的配制方法

如题所述

MTT 法是一种常用的实验技术,其关键步骤之一是MTT溶液的配制。首先,需要准备的MTT浓度为5毫克每毫升。具体操作是,取0.5克MTT粉末,将其溶解于100毫升的磷酸缓冲液(通常选择PBS)或者无酚红的培养基中。在溶解过程中,确保容器的清洁,以保证溶液质量。完成溶解后,使用0.22微米的滤膜过滤,以去除溶液中的细菌,确保实验的精确性和安全性。过滤后的溶液应避光,储存在4℃的环境中,以防止光照和温度变化对其稳定性产生影响。在配制和保存过程中,为了防止溶液与容器发生化学反应,建议使用铝箔纸包裹容器,以保持最佳的保存条件。


在操作过程中,务必注意个人防护和实验室卫生,确保实验操作的规范性。在使用MTT溶液前,务必充分摇匀,以确保MTT均匀分布在溶液中。配制好的MTT溶液应在有效期内使用,避免因为保存不当导致的变质影响实验结果。


扩展资料

MTT法又称MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。

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