琼脂糖凝胶电泳的原理

Question

如题所述

Answer 1

琼脂糖凝胶电泳的原理：琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大。

琼脂糖凝胶电泳是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。对于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等，一般可采用孔径较大的琼脂糖凝胶进行电泳分离。原理基于DNA分子在电场中的迁移率不同。在琼脂糖凝胶中，DNA分子根据其大小和电荷在电场中移动。DNA分子越大，其迁移率越低；反之，较小的DNA分子具有较高的迁移率。

当DNA分子通过琼脂糖凝胶时，它们受到电场的影响而移动。由于不同大小的DNA分子在凝胶中的移动速度不同，因此它们会在不同的时间通过凝胶。这样，不同大小的DNA分子就被分离成了不同的条带。

通过观察这些条带，我们可以确定样品中DNA分子的数量和大小分布。这对于DNA分析和鉴定非常有用，例如在基因克隆、DNA测序、基因诊断和生物技术研究中。琼脂糖凝胶电泳具有高分辨率和准确性，因此在生物医学领域中被广泛使用。

琼脂糖凝胶电泳的操作流程

1、电泳方法

一般的核酸检测只需要琼脂糖凝胶电泳就可以；如果需要分辨率高的电泳，特别是只有几个bp的差别应该选择聚丙烯酰胺凝胶电泳；用普通电泳不合适的巨大DNA链应该使用脉冲凝胶电泳。注意巨大的DNA链用普通电泳可能跑不出胶孔导致缺带。

2、凝胶浓度

对于琼脂糖凝胶电泳，浓度通常在0.5～2%之间，低浓度的用来进行大片段核酸的电泳，高浓度的用来进行小片段分析。低浓度胶易碎，小心操作和使用质量好的琼脂糖是解决办法。注意高浓度的胶可能使分子大小相近的DNA带不易分辨，造成条带缺失现象。