可溶性糖含量的测定方法有哪些

Question

如题所述

Answer 1

测定方法有以下几种：
1.蒽酮法测定可溶性糖
2.苯酚法测定可溶性糖
3.3 ,5 –二硝基水杨酸比色法测定还原糖
4.斐林试剂比色法测定还原糖

斐林试剂比色法测定还原糖步骤

一、原理
植物组织中的可溶性糖可分为还原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非还原糖（主要是蔗糖）两类。还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的 Cu 2+ 还原成 Cu + ，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比，在 590 nm 波长下比色测定吸光度，查标准曲线，即可计算出所测样品中还原糖的含量。本方法也可用于测定蔗糖及总糖含量。

二、实验材料、试剂与仪器设备
（一）实验材料
新鲜植物样品或烘干粉碎过的植物样品。

（二）试剂
1. 斐林试剂 A 液： 40 g CuSO 4 · 5H 2 O 溶解于蒸馏水定容至 1000 mL 。
2. 斐林试剂 B 液： 200g 酒石酸钾钠（ KNaC 4 H 4 O 6 · 5H 2 O ）与 150g NaOH 溶于蒸馏水中，并定容至 1000 mL 。
A 、 B 两液分别贮存，使用前等体积混合。
3. 0.1 ％葡萄糖标准液：取 80 ℃下烘至恒重的葡萄糖 0.1000 g ，加蒸馏水溶解，定容至 100 mL 。
4. 0.1mol/LNaOH 。
5. 甲基红指示剂： 0.1 g 甲基红溶于 250 mL 60 ％乙醇中。 6. 10 ％ Pb(Ac) 2 。 7. 饱和 Na 2 SO 4 。

（三）仪器设备
分光光度计，分析天平，离心机，水浴锅，具塞刻度试管，刻度吸管，容量瓶，研钵。

三、实验步骤
1 . 标准曲线的制作 取 7 支试管，按表 24 – 4 分别加入各溶液。 将以上各管混合后加塞，于沸水浴中加热 15 min 。取出后自来水冷却， 1500 r/min 离心 15 min 。取上清液，用分光光度计在 590 nm 波长下比色，以蒸馏水作对照，读取吸光度。用空白管的吸光度与不同浓度糖的各管的吸光度之差为横坐标，对应的糖含量为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中还原糖的提取 取新鲜的植物样品洗净、擦干、剪碎，称取 3.00 g ，放入研钵中研磨至糊状，用水洗入大试管中。体积为 10 ～ 15 mL 时，加 2 ～ 3 滴甲基红指示剂，如呈红色，可用 0.1 mol/L 的 NaOH 中和至微黄色。若用风干样品，可称取干粉 3.00 g ，先在烧杯中用少量水湿润，然后用水洗入 250 mL 容量瓶中，如显酸性，可用上法中和。 将大试管置于 80 ℃的恒温水浴中保温 30 min ，其间摇动数次，以便将还原糖充分提取出来。对含蛋白质较多的样品，此间可加 10 ％ Pb(Ac) 2 ，除去蛋白质，至不再产生白色絮状沉淀时，加饱和 Na 2 SO 4 除去多余的铅离子。 30 min 后取出冷却，将提取液全部转入 100 mL 容量瓶中。定容至刻度，摇匀后过滤待测。
3. 样品测定 吸取 6 mL 待测液，加 4 mL 斐林试剂，其他操作与标准曲线相同，在 590 nm 波长下读取吸光度。以不含样品的空白管的吸光度减去样品管的吸光度，在标准曲线上查出糖含量。

Answer 2

可溶性糖含量的测定方法：

       蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法

蒽酮比色法

 糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含

量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强

度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。

铜还原碘量法

试剂中的Cu2+与还原糖作用，生成氧化亚铜(Cu2O)沉淀。加入H2SO4后，氧化亚铜

溶解生成Cu+,试剂中的KIO3与KI在酸化的同是生成I2。 

KIO3+5KI+3H2SO4→3K2SO4+3H2O+3I2，然后Cu+被I2氧化，2Cu++I2 →2Cu+ 2I-

 溶液中剩余的碘以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液滴定：Na2S2O3+ I2  → Na2S2O6 + 2NaI 同时以水代替样试液做空白滴定，将空白与样品的滴定差值带入由滴定标准系列糖液计算的回归方程中，即可求得所求试样中还原糖的含量。

费林试剂法

在沸热条件下，用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时将费林试剂中的二价铜还原为一价铜,以亚甲基蓝为指示剂,稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。

 原子吸收法

将样液与过量的碱性铜盐反应，使产生沉淀，然后取上层清液用原子吸收分光光谱

仪测定剩余铜含量，通过标准曲线计算水果蔬菜中可溶性糖含量

气相色谱法

用糖醇衍生化成乙酸酯，用石英毛细管色谱柱对稻子、小麦麸皮样品进行分析测定，得到样品中可溶性NSP各组成单糖的色谱峰，并依据色谱图提供的数据计算样品中可溶性非淀粉各组成单糖的含量及其总含量

液相色谱-蒸发光散射法

不挥发样品颗粒对光的散射程度与其质量成正比。

连续流动法

用盐酸直接水解样品中的可溶性糖，然后用连续流动分析仪测定样品中可溶性糖的含量。

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Answer 3

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