é
µæ¯åæ交系ç»ç±FieldsåSongçé¦å
å¨ç 究çæ ¸åºå 转å½è°æ§ä¸å»ºç«ãå
¸åççæ ¸çç©è½¬å½å åï¼ å¦GAL4ãGCN4ãçé½å«æäºä¸ªä¸åçç»æåï¼ DNAç»åç»æå(DNA-binding domain)å转å½æ¿æ´»ç»æå(transcription-activating domain)ãåè
å¯è¯å«DNAä¸çç¹å¼åºåï¼ å¹¶ä½¿è½¬å½æ¿æ´»ç»æåå®ä½äºæè°èçåºå çä¸æ¸¸ï¼ 转å½æ¿æ´»ç»æåå¯å转å½å¤åä½çå
¶ä»æåä½ç¨ï¼å¯å¨å®æè°èçåºå ç转å½ãäºä¸ªç»æåä¸ä½å¯å¨å
¶è¿æ¥åºéå½é¨ä½æå¼ï¼ä»å
·æåèªçåè½ãèä¸ä¸å两ç»æåå¯é建åæ¥è½¬å½æ¿æ´»ä½ç¨ã
ä¸æå
é
µæ¯åæ交系ç»åç
ç±»å
ç³»ç»åç
å¦
GAL4
è±æ
DNA-activating domain
å¿«é
导èª
ä¼ç¹åºç¨
äºç±»è½½ä½
é
µæ¯åæ交系ç»å©ç¨æ交åºå éè¿æ¿æ´»æ¥éåºå ç表达æ¢æµèç½ï¼èç½çç¸äºä½ç¨ã主è¦æäºç±»è½½ä½: a å«DNA -binding domainçè½½ä½; b å«DNA-activating domainçè½½ä½ãä¸è¿°äºç±»è½½ä½å¨æ建èååºå æ¶ï¼ æµè¯èç½åºå ä¸ç»æååºå å¿
é¡»å¨é
读æ¡å
èåãèååºå å¨æ¥åæ ªä¸è¡¨è¾¾ï¼å
¶è¡¨è¾¾äº§ç©åªæå®ä½äºæ ¸å
æè½é©±å¨æ¥ååºå ç转å½ãä¾å¦GAL4-bdå
·ææ ¸å®ä½åºå(nuclear-localization sequence)ï¼ èGAL4-ad没æãå æ¤ï¼å¨GAL4-adæ°¨åºç«¯æ羧åºç«¯åºå
éæ¥èªSV40çT-æåçä¸æ®µåºåä½ä¸ºæ ¸å®ä½çåºåã
ä¼ç¹
åæ交系ç»çå¦ä¸ä¸ªéè¦çå
件æ¯æ¥éæ ªãæ¥éæ ªæç»æ¹é çãå«æ¥éåºå (reporter gene)çéç»è´¨ç²ç宿主ç»èã
æ常ç¨çæ¯é
µæ¯ç»èï¼ é
µæ¯ç»èä½ä¸ºæ¥éæ ªçé
µæ¯åæ交系ç»å
·æ许å¤ä¼ç¹:
ã1ã æäºè½¬åã便äºåæ¶æ©å¢è´¨ç²ã
ã2ãå
·æå¯ç´æ¥è¿è¡éæ©çæ è®°åºå åç¹å¾æ§æ¥éåºå ã
ã3ãé
µæ¯çå
æºæ§èç½ä¸æåæ¥æºäºåºä¹³å¨ç©çèç½ç»åã
ä¸è¬ç¼ç ä¸ä¸ªèç½çåºå èåå°æç¡®ç转å½è°æ§å åçDNAï¼ç»åç»æå(å¦GAL4-bdï¼ LexA-bd)ï¼ å¦ä¸ä¸ªåºå èåå°è½¬å½æ¿æ´»ç»æå(å¦GAL4-adï¼ VP16)ã
æ¿æ´»ç»æåèååºå 转å
¥è¡¨è¾¾ç»åç»æåèååºå çé
µæ¯ç»èç³»ä¸ï¼èç½é´çä½ç¨ä½¿å¾è½¬å½å åé建导è´ç¸é»çæ¥éåºå 表达(å¦lacZ)ï¼ä»èå¯åæèç½é´çç»åä½ç¨ã
åºç¨
é
µæ¯åæ交系ç»è½å¨ä½å
æµå®èç½è´¨çç»åä½ç¨ï¼å
·æé«åº¦æææ§ã
主è¦æ¯ç±äºï¼
â éç¨é«æ·è´å强å¯å¨åç表达载ä½ä½¿æåèç½è¿é表达ã
â¡ä¿¡å·æµå®æ¯å¨èªç¶å¹³è¡¡æµåº¦æ¡ä»¶ä¸è¿è¡ï¼ èå¦å
ç«å
±æ²æ·çç©çæ¹æ³ä¸ºè¾¾å°æ¤æ¡ä»¶éè¿è¡å¤æ¬¡æ´æ¶¤ï¼éä½äºä¿¡å·å¼ºåº¦ã
â¢æ交èç½é´ç¨³å®åº¦å¯è¢«æ¿æ´»ç»æååç»åç»æåç»åå½¢æ转å½èµ·å§å¤åç©èå¢å¼ºï¼åè
åä¸å¯å¨åDNAç»åï¼ æ¤ä¸å
å¤åä½ä½¿å
¶ä¸åç»åçç»åè¶äºç¨³å®ã
â£éè¿mRNA产çå¤ç§ç¨³å®çé
¶ä½¿ä¿¡å·æ¾å¤§ã åæ¶ï¼ é
µæ¯è¡¨åï¼ X-GalåHIS3èç½è¡¨è¾¾çæ£æµæ¹æ³åå¾ææã
温馨提示:答案为网友推荐,仅供参考