实验方法|细胞毒CCK-8

如题所述

探索细胞活力的秘密:CCK-8试剂盒的精密应用解析



CCK-8,全称为Cell Counting Kit-8,是一种卓越的细胞活性检测工具,凭借其无放射性、高灵敏度及简便操作的特点,被广泛应用于科研领域。这款试剂盒的核心原理基于WST-8,它在电子耦合剂的作用下,能够通过线粒体内的脱氢酶催化,生成橙黄色的甲瓒(Formazan)。值得注意的是,活细胞内的脱氢酶活性直接影响甲瓒的形成,从而直观反映细胞的数量和活力状态。吸光度(OD值)的测定,与细胞活力成正比,使得CCK-8的检测效能远超同类试剂如MTT、XTT、MTS或WST-1。



实验验证一:细胞毒性与治疗潜力



在验证iZAK2对衰老相关自身免疫的治疗效果时,研究者使用CCK-8对小鼠原代CD4+ T细胞进行评估。实验结果显示,iZAK2处理并未影响细胞活力或细胞质DNA积累,反而在老龄小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中表现出减轻自身免疫症状的能力,充分展示了其作为潜在治疗药物的优异性能。



实验验证二:炎症与凋亡抑制的验证



在体外实验中,CCK-8被用于测定H9C2细胞在不同复氧时间和poly (I:C)浓度下,糖氧剥夺(OGD)诱导的炎症和凋亡反应。CCK-8法显示,poly (I:C)预处理显著抑制了细胞死亡,证明了其在抑制炎症和细胞凋亡中的作用。



细胞增殖与吞噬作用的探索



吞噬死亡细胞对于组织稳态与炎症抑制至关重要,传统认为专职吞噬细胞如巨噬细胞和树突状细胞主导这一过程。然而,研究表明非专职细胞也扮演重要角色。尽管吞噬死细胞能提供营养,但实验数据并未显示出显著的增殖差异,揭示了吞噬作用在细胞增殖中的微妙平衡。



APExBIO的CCK-8试剂盒提供了一种高效实用的工具,其使用技巧如下:




    问:孵育后多长时间可进行检测?答:一般1-4小时,30分钟后肉眼可见显色,具体时间需根据最佳显色效果确定。
    问:如何排除还原剂干扰?答:通过空白孔测定吸光度,若值小则无干扰,若大则需洗涤细胞并调整检测步骤。
    问:酚红对结果有影响吗?答:酚红不影响,可通过背景扣除消除其影响。
    问:如何终止CCK-8反应?答:可选择冷藏、添加酸或SDS溶液等方法。


在数据处理上,SPSS、Graphpad和Excel是常用工具。通过计算抑制率,我们能准确评估药物效应,如细胞抑制率的计算公式是:Cell viability=(OD_Drug-OD_Blank)/(OD_Control-OD_Blank)×100%,而Cell inhibition则为1-Cell viability。



绘制美观的图示,清晰地展示50%抑制率的虚线,将实验结果直观呈现,是科学论文中不可或缺的组成部分。



总结来说,CCK-8试剂盒以其独特的优势,成为科研人员探索细胞活力和毒性反应的利器,精准的数据分析和可视化结果,为揭示细胞生物学机制提供了有力支持。

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