第1个回答 2022-06-06
二、进行RNA提取以及反转时的注意事项（提取大豆RNA和反转录）
1、测量核酸含量时应进行三次重复（因为机器也有误差）
2、RNA完整度
（？）A260/A280为2.1-2.2是正常范围（？）
3、跑胶验证RNA完整性（理论上在提取RNA后，不仅应该测量吸光度的比值，也应当跑胶进行完整性验证。因为机器的吸光度只是一个大致参考）
（？）配胶注意事项（？）
4、稀释
（1）在进行反转时，RNA需要按照试剂盒的浓度进行稀释，但不要稀释浓度过低。一般200—250ng/ml即可。
（在进行反转时一定要注意计算自己需要多少rDNA，以便进行后续实验。一般把RNA全都进行反转？）
（2）在进行反转录之前进行浓度测量，稀释至浓度一致即可。在进行反转录之后不用再进行浓度测量，因为此时的体系中有裂解的RNA，反转录的DNA等，无法进行测量。在反转录之前保持浓度一致即可。
（3）稀释时要先拿移液枪抽取一定量的RNA，进行准确测量，然后再进行稀释。
5、分装
不论是RNA还是反转录DNA都需要分装（反复冻融容易造成样品降解，至少平均分装成三份）