细胞转染了GFP固定后还能发荧光吗

Question

如题所述

Answer 1

细胞转染GFP质粒并进行表达之后，一般细胞内会有大量的GFP蛋白，可以发出绿色荧光。
GFP发出绿色荧光的原理是Ca离子进入GFP的beta-barrel结构中引起的特定能级，因此只要这个结构仍然保持着，就可以发出荧光。
由于GFP的beta-barrel结构非常稳定，一些版本的GFP蛋白（如EGFP）甚至能抵抗94C的高温几分钟而不完全变性，因此想在溶液状态下去掉GFP的荧光是很难的，一般需要用光漂白法。
基于其非常稳定的结构，即便细胞被固定了，仍然会有一部分的GFP蛋白保持其构象而发出荧光。此时荧光可能较弱。在荧光显微镜下是有可能看得到的。

Answer 2

现提供一些GFP资料
1.1.GFP和EGFP
1.1.1.结构 至今只有水母中的GFP基因被克隆。水母中的GFP由238个氨基酸组成，分子量为27kD。野生型GFP被紫外和蓝光激发后，能发出绿色荧光 [1]。野生型GFP有一些特点，如荧光较弱、易受温度影响、产生荧光过程滞后等。目前，已有多种GFP的突变体问世[2]。这些突变体萤光增强、蛋白折叠效率增加，如目前常用的EGFP，其发光强度比野生型GFP高35倍[3]。
1.1.2.特点　GFP最大的特点是不需要底物或辅因子，可对活体检测,因而可对被标记对象进行动态、连续的观察。①体积小　只有Lac Z的1/5,表达无种属限制。②荧光表达稳定　即使是在甲醛或戊二醛固定的标本中，GFP的荧光仍能保持稳定。③不仅可与其它标记物，也可用不同突变体同时进行多种标记。④检测方便　常用荧光显微镜,激光扫描共聚焦显微镜观测。⑤无放大作用　因而很多情况下需要强启动子。
1.1.3.应用 ①标记基因　由于GFP诸多优点,越来越多的人倾向于用它代替传统的分子标记物。②荧光动物模型　用强启动子让GFP在转基因动物全身表达,就形成了绿色荧光动物模型。这类模型不仅提供有GFP标记的各种细胞、组织、器官,还可做为器官移植实验的动物模型。本回答被提问者和网友采纳

Answer 3

现提供一些GFP资料
1.1.GFP和EGFP
1.1.1.结构 至今只有水母中的GFP基因被克隆。水母中的GFP由238个氨基酸组成，分子量为27kD。野生型GFP被紫外和蓝光激发后，能发出绿色荧光 [1]。野生型GFP有一些特点，如荧光较弱、易受温度影响、产生荧光过程滞后等。目前，已有多种GFP的突变体问世[2]。这些突变体萤光增强、蛋白折叠效率增加，如目前常用的EGFP，其发光强度比野生型GFP高35倍[3]。
1.1.2.特点　GFP最大的特点是不需要底物或辅因子，可对活体检测,因而可对被标记对象进行动态、连续的观察。①体积小　只有Lac Z的1/5,表达无种属限制。②荧光表达稳定　即使是在甲醛或戊二醛固定的标本中，GFP的荧光仍能保持稳定。③不仅可与其它标记物，也可用不同突变体同时进行多种标记。④检测方便　常用荧光显微镜,激光扫描共聚焦显微镜观测。⑤无放大作用　因而很多情况下需要强启动子。
1.1.3.应用 ①标记基因　由于GFP诸多优点,越来越多的人倾向于用它代替传统的分子标记物。②荧光动物模型　用强启动子让GFP在转基因动物全身表达,就形成了绿色荧光动物模型。这类模型不仅提供有GFP标记的各种细胞、组织、器官,还可做为器官移植实验的动物模型。