不是很明白楼主的意思，你的意思是进了5针吗？每个都给出保留时间还是一张图上有5个峰呢？
分离度是计算临近2峰的，单个峰是没有办法说分没分开的问题的。
如果是5张图上的话，每张图都要算对照和临近峰之间的分离度，而且尽量重复性高。要是是一张图上的5个峰的话就要算对照品临近两峰之间的分离度了。
一般的液相色谱工作站都会自动给出，你可以向以前做过的人咨询一下应该怎么设置。
分离度又称分辨率,为了判断分离物质对色谱柱在色谱柱中的分离情况,常用分离度作为柱的总分离效能指标.用r表示.r等于相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比.
resolution，r
相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。r越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当r＜1时，两峰有部分重叠；当r=1.0时，分离度可达98%；当r=1.5时，分离度可达99.7%。通常用r=1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。当r＝1时，称为4σ分离，两峰基本分离，裸露峰面积为95.4%，内侧峰基重叠约2%。r＝1.5时，称为6σ分离，裸露峰面积为99.7%。r≥1.5称为完全分离。《中国药典》规定r应大于1.5。
分离度计算公式：r=2(tr2-tr1)/(w1+w2)
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