为了成功提取甘油菌的质粒DNA，首先从基础做起，我们需要准备适合的培养基。LB培养基是提取过程的关键，它由10克胰蛋白胨、5克酵母提取物和10克NaCl组成，加入去离子水至800毫升，充分溶解后，用5mol/L NaOH调整至pH7.4。确保LB培养基经过高压蒸汽灭菌20分钟，与枪头和PBS一同处理，冷却至50°C以下后加入抗生素，如氨苄青霉素100 μg/ml、卡那霉素10-50 μg/ml等，具体浓度需参考说明书。活化甘油菌是提取质粒DNA前的重要步骤。首次活化可取200μL菌液与抗生素LB混合，37°C下以200rpm摇动12-16小时，观察菌液浑浊度，保持微开状态防止厌氧环境。后续的正常活化则需要将甘油菌液稀释1:500至1:1000，培养12-16小时，使菌液密度达到3-4×109/mL，此时OD600应在0.5左右，表明细胞活力最佳。
对于菌液的存储，短期可放于4°C，长期保种则需将菌液与30%甘油以1:70的比例混合，储存在-80°C的条件下，确保质粒DNA的稳定。
在质粒提取方面，市场上的品牌繁多，如TIANGEN和Omega，选择时需根据实验需求，如是否要求无内毒素、是否用于测序等。以TIANGEN为例，根据提取目的，选择适合的中提、大提试剂盒。详细步骤可参考TIANGEN试剂盒说明书或在线搜索提质粒的教程视频，例如B站或官方平台。
最后，测定质粒DNA的浓度和纯度，通常使用紫外分光光度计，也可用酶标仪替代。通过琼脂糖凝胶电泳，我们可以观察DNA的条带，从而准确评估其浓度和纯度，为后续实验提供可靠数据。