常用的骨髓间充质干细胞（ BMSCs）分离、纯化方法你掌握了吗？

Question

如题所述

Answer 1

深入探索：骨髓间充质干细胞（BMSCs）分离、纯化与鉴定的奥秘

在生物医学领域的前沿研究中，骨髓间充质干细胞（BMSCs）因其多能性而备受瞩目，它们在抗瘤、移植、修复与免疫疾病治疗中展现出巨大潜力。探索其分离与纯化的高效途径，是科学家们不懈追求的目标。以下是SD大鼠BMSCs处理的详细步骤，让我们一起揭秘这个过程的科学魅力。

1. 严谨的全骨髓提取

首先，通过颈椎脱臼法进行全骨髓提取，对股骨和胫骨进行消毒，然后冲洗并分离骨髓。随后，通过离心和稀释，得到富含细胞的悬液，这是后续分离的第一步。

2. 培养与观察

细胞被计数后，置于恒温培养箱中，10% CO₂环境中培养，密切关注细胞状态，适时更换培养基以维持最佳生长环境。

3. 成骨与脂诱导的诱导分化

当细胞密度达到80%时，进行传代。成骨诱导过程中，细胞被消化并接种，定期更换培养基，观察钙盐结晶并通过ARS染色和BMP2、Runx2表达鉴定。成脂诱导则通过ORO染色和PPARγ标志基因表达来评估。

5. 通过流式细胞术鉴定

先将细胞离心、洗涤并稀释，然后加入抗体进行标记，经过分步洗涤和离心，最终在流式细胞仪上进行高精度检测。
鉴定标准包括CD90、CD105、CD73的阴性表达，以及CD45、CD34等其他标记物的缺失，以确认细胞的纯度和特异性。

6. 细胞纯度与分化鉴定

通过消化、离心、洗涤，调整细胞密度后，使用抗体检测法进一步确认BMSCs的纯度。CD29、CD31、CD44和CD45的表达是评估纯度的关键指标。

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