收集些RNA实验文献资料，为论文做准备。。酵母RNA的提取，确定RNA质量等等

Question

如题所述

Answer 1

RNA的提取最经典的也是最靠谱的还是TRIZOL提取

1．1TRIZOL试剂盒提取酵母菌总RNA
按BBI公司提供的TRIZOL试剂使用说明书进行操作：取1ml指数中期的酵母培养液，经计数后（酵母菌每1×108个加1mlTRIZOL）离心收集菌体，加入1mlTRIZOL，混匀，激烈振荡，室温放置5min，加入200μl氯仿，剧烈振荡30s，12000×g离心5min，上层水相移入一个新离心管中，加入等体积的异丙醇，室温放置5min，12000×g高速离心5min弃上清，用75％乙醇洗涤RNA沉淀2次，用30μlDEPC－H2O溶解RNA沉淀。产物用于电泳分析或在－20℃保存。
1．2TRIZOL试剂盒改进方法提取酵母菌总RNA
在收集菌体之前加入1％的蜗牛酶30℃温育20min（对照组温育50min），然后进行菌体离心收集加入1mlTRIZOL，混匀，振荡，冰浴5min，加入200μl氯仿，剧烈振荡30s，12000×g，4℃离心5min，上层水相移入一个新离心管中，加入等体积的异丙醇，冰浴5min，12000×g，4℃离心10min，弃上清，用75％乙醇洗涤RNA沉淀2次，用30μlDEPC－H2O溶解RNA沉淀。产物用于电泳分析或在－20℃保存。
1．3总RNA浓度及纯度检测
将采用上述三种方法得到的酵母总RNA溶于DEPC－H2O中，取一定量的样品稀释N倍至200μl混匀，加入微量比色杯中，用紫外分光光度计测量样品的A，230A260，A280的值（以DEPC－H2O为空白调整零点）。
RNA样品浓度（μg／μl）为：A260×N×40／1000。
据此浓度计算酵母菌总RNA产量，以A260／A280，A／260A230比值的大小判定RNA样品的纯度。每样品重复3次取平均值