原理:转化:将外源
DNA分子引入受体细菌,使之获得新的遗传性状。
受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株,不含
限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-,M-),可以容忍外源DNA分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法,如电击或CaCl2、RbCl/KCl等化学试剂的处理后,
细胞膜的通透性增高,成为感受态细胞(Compenent cells),使外源DNA分子得以进入。
目前常用的感受态细胞制备方法有CaCl2和RbCl/KCl法,RbCl/KCl法制备的感受态细胞转化效率较高,但CaCl2法简便易行,且其转化效率完全可以满足一般实验的要求,制备出的感受态细胞暂时不用时,可加入无菌
甘油至总体积15%,于-70℃保存半年之久,因此CaCl2法为使用更广泛。
生物帮上面有的,功能分析细胞系
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