怎样用DNA分子杂交技术证明目的基因转录出mRNA?

Question

怎样就证明有mRNA,怎样就证明没有？

Answer 1

可以用Northern blot技术检测
Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。
Northern blot 首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因互补配对的探针杂交来检测目的片段。“Northern blot”这一术语实际指的是RNA分子从胶上转移到膜上的过程，当然它现在通指整个实验的过程。Northern blot 在1977年由斯坦福大学James Alwine，David Kemp和George Stark发明。Northern blotting实际上依照比它更早发明的一项杂交技术Southern blot（依据生物学家 EdwinSouthern 名字来命名）来命名，Southern blot主要用来对DNA进行分析。
首先需要从组织或细胞中提取总RNA ,或者再经过寡聚（dT）纯化柱进行分离纯化得到mRNA。然后RNA样本经过电泳依据分子量的大小对被分离，随后凝胶上的RNA分子被转移到膜上。膜一般都带有正电荷，核酸分子由于带负电荷可以与膜很好的结合。转膜的缓冲液含有甲酰胺，它可以降低RNA样本与探针的退火温度，因而可以减少高温环境对RNA降解。RNA分子被转移到膜上后须经过烘烤或者紫外交联的方法加以固定。被标记的探针与RNA探针杂交，经过信号显示后表明需检测的基因的表达。Northern blot实验中阴性对照可以采用已经过RT-PCR或基因芯片检测过的无表达的基因。来自：求助得到的回答

Answer 2

您好,所采取的原理是分子杂交技术
①mRNA与DNA可以杂交，因为两者组成的基本单位核糖核苷酸和脱氧核糖核苷酸可以进行碱基互补配对。由是否出现杂交带，可以判断出目的基因是否转录出mRNA、
②取一段新的含有目的基因的DNA片段，用放射性同位素等作标记，以此来作为探针，将探针与mRNA杂交，来检测是否出现放射性

若未出现杂交带或者未出现放射性则证明无mRNA
希望我的回答对您有帮助
感谢您的采纳啦O(∩_∩)O哈！追问

第二个里边，将探针与mRNA杂交，是不是没有放射性就说明探针与mRNA没杂交，就说明没有mRNA？还有我不明白为什么杂交了才能有放射性？

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