DNA提取的步骤及原理

如题所述

酚-氯仿法提取人外周血基因组DNA的基本原理是什么?
答:蛋白质对DNA制品的污染常常影响到以后的DNA操作过程,因此需要把蛋白质除去。一般采用苯酚/氯仿抽提的方法。苯酚、氯仿对蛋白质有极强的变性作用,而对DNA无影响。经苯酚/氯仿抽提后,蛋白质变性而被离心沉降到酚相与水相的界面,DNA则留在水相。
取ACD抗凝血2~3ml,置于15ml的离心管内----加灭菌生理盐水至10ml,颠倒混匀,3000rpm,离心10min-----弃上清,重复步骤2两至三次,直至上清呈无色或微红色----加压积红细胞5.5倍的溶血试剂,混匀,放置-20℃冷溶10min后移至4℃,30min,直至溶液由红色悬液变成红棕色清亮溶液-----3000rpm,离心15min,倒扣离心管于滤纸,使管壁液体流尽-----依次加入STE 450 ml,用枪头吹打混匀后,加入蛋白酶K至终浓度100mg/ml,然后加入10% SDS 25 ml,混匀后移至1.5ml EP管,放置于37℃水浴过夜或56℃,3h----加入等体积饱和酚(约500ml),漩涡振荡器上混匀至溶液呈乳滴状,13000rpm,离心5min。------取上清,加入500μl酚/氯仿(等体积配制混合液),漩涡振荡混匀,13000rpm,离心10min。---------取上清,加入500μl氯仿/异戊醇(24:1混合),漩涡振荡混匀,13000rpm,离心10min。-------取上清,加入50μl物NaAc(1/10体积),混匀后再加入1ml 冰冻的无水乙醇,颠倒轻摇,即可见絮状的DNA沉淀,13000rpm,离心10~20秒,得到DNA沉淀。------------DNA沉淀用70%乙醇洗2~3遍。--------待乙醇挥发后,DNA沉淀用100μl TE缓冲液溶解,核酸蛋白测定仪分析DNA浓度和纯度,-20℃保存备用。
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第1个回答  2012-12-03
方法很多,你想问什么,楼上已经给你列出了经典的教科书的方法
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