干扰素(IFN)生物学活性检测干扰素(IFN)根据其产生细胞不同和理化性质、犐z物学特性的差异可分为α干扰素(IFN-α)、β干扰素(IFN-β)和γ-干扰素(IFN-γ)。它们在机体免疫调节、抗病毒感染中具有重要作用。检测IFN的方法主要分为定量测定(常用ELISA)和生物学活性的检测，后者较为常用。 (一)原理 干扰素能刺激某些指示细胞(如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以及人胚肌皮或肺单层细胞)产生抗病毒蛋白，从而使细胞免受水疱性口炎病毒(VSV)的攻击，根据待测样品不同稀释度的保护能力，计算出干扰素生物学活性单位。 (二) 操作步骤 96孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN， 每个稀释度设3孔，每孔50μl，病毒对照不加IFN 每孔加入100μl 1.5～2×105／ ml Wish 或Hep-2细胞悬液，37℃、CO?孵箱培养6～12h， 使细胞贴壁为单层 每孔加入50μl含100个 TCID50 VSV, 细胞对照不加病毒液 根据细胞病变状态，终止培养前3～4h 加入5mg／ml MTT, 15μL／孔 加入适量生理盐水，用滴管轻轻吹吸 弃去悬浮病变细胞和死细胞 200μl／孔 二甲亚砜(DMSO)，作用10min 测OD(570nm),表示活细胞中含甲 的量， 也可用刚果红摄入法、结晶紫染色法 测定IFN对活细胞的保护水平 计算: 以保护半数(50％)细胞免受病毒损害的最高干扰素稀释度为1个干扰素活性单位。也可从标准曲线中求得待测样品的IFN活性单位。 (三) 试剂和器材 1. VSV 2. WISH、HeP-2细胞株或人胚肌皮或肺单层培养物。 3. MTT[3-(4,5二甲噻唑-2-yl)-2,5-2苯基-四唑溴盐]，二甲亚砜(DMSO)，刚果红，结晶紫等。 4. 10％FCS RPMI1640, 培养板、培养瓶、CO?孵箱、超净台、酶联检测仪。 (四) 注意事项 1. 实验时先加IFN，后加指示细胞，以使细胞均匀分布于培养板底部。 2. 本法对天然培养上清或重组IFN-α、IFN-β和IFN-γ均可检测其活性单位。
