测定蛋白质浓度的方法主要有

Question

如题所述

Answer 1

酪安酸差色光谱法

1.打开分光光度剂，预热30分钟，是紫外灯处于稳定发光状态

2.在2容积为1mlde 微量石英比色杯中分别加入900ulPH7.4,PH12.0的0.1mol/l磷酸缓冲液，把盛有PH12.0缓冲液的比色杯放入样品杯中放入支架上，把盛有PH7.4缓冲液的比色杯放入到参比杯的支架上，然后准确的测出295nm波长下的光吸收值，或用250－350nm扫描

3.在上述的2个比色杯中分别加入100UL的待测样品液，小心振荡混匀

4.重复2操作

5.计算蛋白浓度：﹝(PH为12.0A295-PH为7.4A295)/2.330×N﹞×W

N是蛋白分子中酪安酸毫摩尔消光系数之差

W是样品稀释倍数

紫光吸收法测定蛋白浓度

1.用品和仪器：紫外分光光度剂，微量自动取液仪

2.试剂：标准蛋白质溶液：准确称重的纯净蛋白质，配成1mg/ml储液置于4度中备用

0.1mol/l磷酸缓冲液，PH7.4;0.1mol/l磷酸缓冲液，PH12.0

3.试验程序：

1，在2个洁净干净的石英比色杯中（内径25px）中加入蒸馏水或其他用于溶解标准蛋白质与待测样品的缓冲液，其中一个作为参比杯（在以后测量不变），另一个作为样品杯，放入分光光度剂的相应位置。

2，记录下空白杯在280260nm处的光吸收值，或对之进行250－350nm波长范围的基线扫描。

3，移去样品比色杯中的蒸馏水或是缓冲液，干燥比色杯（用滤纸吸取残液）

4，在样品比色杯中加入待测样品液，在实验中提取样品30ul加入2970ul双证水，混匀，样品液事先通过离心或用0.2um孔径的滤膜过滤。