双缩脲法测定蛋白质含量计算

Question

如题所述

Answer 1

双缩脲法测定蛋白质含量计算如下：

学习双缩脲法测定蛋白质的原理和方法

实验原理：

具有两个或两个以上肽键的化合物皆有双缩脲反应。在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫红色复合物。

而蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似，也能与铜离子形成紫红色配位化合物，其最大光吸收在540nm处。

其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质的相对分子质量及氨基酸的组成无关，该法测定蛋白质的浓度范围适用于1~10mg/mL，双缩脲法常用于蛋白质的快速测定。

实验操作：

取双缩脲试剂、10mg/mL的标准蛋白溶液和待测蛋白溶液（稀释10倍的人血清），按下表配制6支溶液：

紫外吸收测定法目的要求：了解紫外吸收法测定蛋白质含量的原理。

掌握紫外分光光度计的使用方法。

实验原理：蛋白质分子中所含酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，使蛋白质在280nm 波长处有最大吸收值。在一定浓度范围内，蛋白质溶液的光吸收值（A280）与其含量成正比关系，可用作定量测定。

紫外线吸收法测定蛋白质含量的优点是迅速、简便，不消耗样品，低浓度盐类不干扰测定。因此。广泛应用在柱层析分离中蛋白质洗脱情况的检测。

此法的缺点是∶（1）对于测定那些与标准蛋白质中酪氨酸和色氨酸含量差异较大的蛋白质，有一定的误差。（2）若样品中核酸等吸收紫外线的物质，会出现较大的干扰。不同的蛋白质和核酸的紫外线吸收是不同的，即使经过校正，测定结果也还存在一定的误差。